[发明专利]一种脱细胞猪小肠粘膜下层快速制备方法

说明书

本发明提供了一种脱细胞猪小肠粘膜下层快速制备方法，包括脱脂处理的步骤，且在脱脂处理前设有一次脱细胞处理的步骤，在脱脂处理步骤后设有二次脱细胞处理的步骤和复性处理的步骤。本发明所述的脱细胞猪小肠粘膜下层快速制备方法，不仅能快速有效地去除组织中所有的细胞等相关抗原成分，同时能保持其细胞外基质ECM的良好化学组成和机械特性。

技术领域

本发明属于医用组织修复材料的制备技术领域，尤其是涉及一种以猪小肠为材料的脱细胞猪小肠粘膜下层(p-SIS)快速制备方法。

背景技术

天然生物组织修复材料，是根据再生医学原理、分子生物学原理及免疫学原理，通过除抗原等一系列技术从天然生物组织中提取出的细胞外基质，是一种超微组织支架--细胞支架，把它植入人体后，能起到很好的支架作用，诱导组织细胞向该支架迁移，启动人体自身修复功能，使细胞在该位置上逐渐生长出新的组织，填补受损部位的缺失组织，完成器官组织再生。

猪小肠粘膜下层(porcine small intestinal submucosa，p-SIS)组织修复材料是由猪小肠粘膜下层获得的异种细胞外基质(extracellular matrix，ECM)材料，是由健康、无病原微生物、在清洁级条件下饲养的家猪小肠制备的新型体内植入生物膜，是具有保护创面、促进组织愈合、再生、修补缺损、细胞载体功能的优良组织修复材料。P-SIS可广泛应用于现代生物医学领域，如肌腱重建、下泌尿道重建、硬脑膜修补、血管重建、修复、部分或全层皮肤损伤。P-SIS生物材料应用前关键的一点就是必须有效去除残留的细胞、细胞膜、DNA等相关抗原性分子，以避免植入人体后产生免疫排斥及严重的炎性反应。

目前常用的脱细胞方法都比较繁琐复杂，主要包括：物理方法、化学方法和消化酶学方法，而且所得产品要不脱细胞不完全，残留抗原性，要不处理过头，降低了最终ECM的机械性能。

发明内容

有鉴于此，本发明旨在提出一种脱细胞猪小肠粘膜下层快速制备方法，以克服现有技术的缺陷，不仅能快速有效地去除组织中所有的细胞等相关抗原成分，同时能保持其细胞外基质ECM的良好化学组成和机械特性。

为达到上述目的，本发明的技术方案是这样实现的：

一种快速制备脱细胞猪小肠粘膜下层的方法，包括一次脱细胞处理的步骤和二次脱细胞处理的步骤，且在两次脱细胞处理的步骤之间设有一脱脂处理步骤。

优选的，所述的快速制备脱细胞猪小肠粘膜下层的方法，包括以下步骤：

S1：预处理：取新鲜猪小肠，清除杂物、刮除表层油脂，柔化肠膜、漂白并杀菌；

S2：一次脱细胞处理：将预处理好的猪小肠粘膜下层漂洗、沥干，转入细胞裂解液中，超声处理或摇荡浸泡后再次漂洗；

S3：脱脂处理：将一次脱细胞处理后的猪小肠粘膜下层漂洗、沥干，转入脱脂液中，室温摇荡浸泡1-6小时或于4℃过夜；

S4：二次脱细胞处理：将脱脂处理好的猪小肠粘膜下层漂洗、沥干，再次转入新的细胞裂解液中，超声处理或摇荡浸泡后漂洗；

S5：将步骤S4处理后的猪小肠粘膜下层进行冻干、包装、辐照消毒处理。

优选的，步骤S1中预处理的方法为：将取新鲜猪小肠剪开、反复清洗干净，再剪成适当长度，用钝刮刀刮除空肠的浆膜层、粘膜层及肌层，用去纯净水清洗干净，然后将其置于新配的预处理液中，浸泡30-60分钟后备用；步骤S2和步骤S4中，超声处理的时间均为1-30分钟，摇荡浸泡的时间均为30-120分钟，漂洗用30-45℃去离子水漂洗，漂洗次数为2-5，每次时间为3-60分钟。