[发明专利]一种脱细胞猪小肠粘膜下层快速制备方法

权利要求书

1.一种快速制备脱细胞猪小肠粘膜下层的方法，其特征在于：包括一次脱细胞处理的步骤和二次脱细胞处理的步骤，且在两次脱细胞处理的步骤之间设有一脱脂处理步骤，包括以下步骤：

S1：预处理：取新鲜猪小肠，清除杂物、刮除表层油脂，柔化肠膜、漂白并杀菌；

S2：一次脱细胞处理：将预处理好的猪小肠粘膜下层漂洗、沥干，转入细胞裂解液中，超声处理或摇荡浸泡后再次漂洗；

S3：脱脂处理：将一次脱细胞处理后的猪小肠粘膜下层漂洗、沥干，转入脱脂液中，室温摇荡浸泡1-6小时或于4℃过夜；

S4：二次脱细胞处理：将脱脂处理好的猪小肠粘膜下层漂洗、沥干，再次转入新的细胞裂解液中，超声处理或摇荡浸泡后漂洗；

S5：将二次脱细胞处理后的猪小肠粘膜下层经漂洗、沥干后转入复性溶液中浸泡2-24小时；

S6：将步骤S5处理后的猪小肠粘膜下层进行冻干、包装、辐照消毒处理；

所述一次脱细胞处理和二次脱细胞处理采用相同的细胞裂解液，该细胞裂解液pH为10-12，其主要组分及含量为，以每升计：硼砂1-10g，碳酸钠5-20g，氯化钠0.3-5M，EDTA 5-50mM，乙基苯基聚乙二醇1-30g。

2.根据权利要求1所述的快速制备脱细胞猪小肠粘膜下层的方法，其特征在于：步骤S1中预处理的方法为：将取新鲜猪小肠剪开、反复清洗干净，再剪成适当长度，用钝刮刀刮除空肠的浆膜层、粘膜层及肌层，用纯净水清洗干净，然后将其置于新配的预处理液中，浸泡30-60分钟后备用；步骤S2和步骤S4中，超声处理的时间均为1-30分钟，摇荡浸泡的时间均为30-120分钟，漂洗用30-45℃去离子水漂洗，漂洗次数为2-5，每次时间为3-60分钟。

3.根据权利要求2所述的快速制备脱细胞猪小肠粘膜下层的方法，其特征在于：步骤S1中，预处理液包括以下质量浓度的各组分：硅酸钠10-300g/L、过氧化氢5-500g/L、胶体银10-500mg/L；预处理液的pH为1.3-2.5；胶体银为10-100nm胶态微粒银离子。

4.根据权利要求3所述的快速制备脱细胞猪小肠粘膜下层的方法，其特征在于：所述预处理液的pH为2；预处理液包括以下质量浓度的各组分：硅酸钠100g/L，过氧化氢60g/L，胶体银40mg/L。

5.根据权利要求1所述的快速制备脱细胞猪小肠粘膜下层的方法，其特征在于：步骤S3中，脱脂液是含有大蒜素和三氯生的三氯甲烷-甲醇混合液，其中大蒜素0.1-5％wt/v三氯生0.05-1％wt/v，溶剂为三氯甲烷-甲醇；三氯甲烷-甲醇为三氯甲烷和甲醇以体积比为1:2混合成的混合液。

6.根据权利要求5所述的快速制备脱细胞猪小肠粘膜下层的方法，其特征在于：所述脱脂液中大蒜素和三氯生的含量分别为1％wt/v和0.2％wt/v。

7.根据权利要求1所述的快速制备脱细胞猪小肠粘膜下层的方法，其特征在于：所述细胞裂解液各组分的含量为，以每升计：硼砂1g，碳酸钠10.3g，氯化钠1M，EDTA 20mM，乙基苯基聚乙二醇10g。

8.根据权利要求1所述的快速制备脱细胞猪小肠粘膜下层的方法，其特征在于：所述复性溶液包括以下各组分：5-50mM Tris-HCl，1-10mM EDTA，1-20％wt/vβ-环糊精；

9.根据权利要求8所述的快速制备脱细胞猪小肠粘膜下层的方法，其特征在于：所述β-环糊精的浓度为5-10％wt/v；所述复性溶液还包括浓度为0.5-5mg/L的抗生素；抗生素为青霉素和硫酸链霉素中的一种或两种；复性溶液体系的pH为7-10。

10.根据权利要求1所述的快速制备脱细胞猪小肠粘膜下层的方法，其特征在于：复性溶液还包括甲硫氨酸、苏氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、缬氨酸中的一种或两种以上，各组分浓度均为0.2-10mg/L。