[发明专利]一种从商陆愈伤组织诱导丛生芽的方法

说明书

本发明提供了一种从商陆愈伤组织诱导丛生芽的方法，具体包括：于诱导培养基中添加商陆顶芽提取物，得到芽分化培养基，再将商陆多种外植体诱导产生的愈伤组织接种于芽分化培养基中进行诱导培养。本发明还提供了商陆顶芽提取物的提取方法。本发明所提供的商陆愈伤组织诱导丛生芽的方法，简单易行，可操作性强，其中以叶柄愈伤组织、叶片愈伤组织、茎段愈伤组织、茎节和顶芽愈伤组织诱导丛生芽的诱导率分别可达到62％、69％、67％、73％和78％，扩大了商陆组织培养中外植体的选择范围和扩繁系数，扩大了商陆组织培养的应用范围，为商陆作为优良的矿质营养遗传资源的进一步研究奠定了基础。

技术领域

本发明属于植物繁殖技术领域，具体涉及一种从商陆愈伤组织诱导丛生芽的方法。

背景技术

商陆(Phytolacca acinosa Roxb)为商陆科商陆属多年生宿根草本植物，是一种传统的药用植物，此外，商陆还具有富集土壤中多种金属离子的作用，商陆还被用于环境修复，利用商陆矿质营养遗传资源对改善作物营养特性和土壤修复具有重要意义，商陆还可以用于病虫害防治和印染业等多个领域。

由于商陆在医药、农业和环保等领域具有重要的应用前景和研究价值，通过商陆组织培养技术大量快速地获取商陆的无性繁殖体系成为研究和应用开发中的现实问题。然而，由于商陆组织富含次生代谢产物，在商陆组织培养中诱导产生的愈伤组织易褐化，从愈伤组织诱导产生丛生芽一直是商陆组织培养快速繁殖的难题。在现有技术中，只有从带顶芽或腋芽的外植体才能诱导出不定芽，或者是从带顶芽的愈伤组织转接到芽分化培养基后才有丛生芽的分化，而不带顶芽或腋芽的愈伤组织均未发现有芽的分化，即使该愈伤组织是由顶芽为外植体诱导产生。因此，现有技术不仅限制了商陆组织培养中外植体的选择范围，也限制了商陆组织培养繁殖系数的进一步扩大。

综上，尚需开发一种新的方法，克服不能从商陆愈伤组织诱导出丛生芽这一技术障碍，从而扩大商陆组织培养中外植体的选择范围和进一步增加繁殖系数。

发明内容

为解决现有技术中，不带芽的愈伤组织不能分化出丛生芽的问题，本发明提供了一种从商陆愈伤组织诱导丛生芽的方法。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种从商陆愈伤组织诱导丛生芽的方法，包括以下步骤：

(1)于诱导培养基中添加商陆顶芽提取物，得到芽分化培养基；

(2)将愈伤组织接种于步骤(1)的芽分化培养基中进行诱导培养；

步骤(1)所述芽分化培养基中，商陆顶芽提取物的浓度为25～75g/L，步骤(2)所述诱导培养的温度为20～25℃，光照强度为1500～2000Lx，光暗周期为14h/10h。

进一步优选地，步骤(1)所述芽分化培养基中，商陆顶芽提取物的浓度为50g/L。

优选地，所述方法进一步包括在步骤(1)之前，通过无菌的硝酸纤维素膜，对商陆顶芽提取物进行过滤消毒，再加入到已高压湿热灭菌后温度降低到50℃以下，但仍未凝固的培养基中混匀。

优选地，所述诱导培养基为添加了植物生长调节剂的MS培养基，所述的植物生长调节剂包括以终浓度计的组分：

6-BA 1.0～3.0mg/L，

NAA 0.1～0.5mg/L。

进一步优选地，所述诱导培养基为添加了植物生长调节剂的MS培养基，所述的植物生长调节剂包括以终浓度计的组分：

6-BA 2.0mg/L，

NAA 0.25mg/L。

优选地，所述芽分化培养基的pH为5.8。