[发明专利]一种从商陆愈伤组织诱导丛生芽的方法

权利要求书

1.一种从商陆愈伤组织诱导丛生芽的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）于诱导培养基中添加商陆顶芽提取物，得到芽分化培养基；

（2）将愈伤组织接种于步骤（1）的芽分化培养基中进行诱导培养；

步骤（1）所述芽分化培养基中，商陆顶芽提取物的浓度为25~75g/L，步骤（2）所述诱导培养的温度为20～25℃，光照强度为1500~2000 Lx，光暗周期为14 h /10 h；

所述商陆顶芽提取物的提取步骤包括：将商陆顶芽在甲醇中冰浴研磨，浸提离心后取上清液；

所述诱导培养基为添加了植物生长调节剂的MS培养基，所述的植物生长调节剂包括以终浓度计的组分：

6-BA 1.0~3.0 mg/L，

NAA 0.1~0.5 mg/L；

所述商陆顶芽提取物的提取步骤进一步包括：

1）将商陆顶芽在预冷的甲醇中冰浴研磨，于4℃冷藏箱中浸提后离心，得到上清液A和残渣A；

2）将残渣A于预冷的甲醇中漩涡振荡后离心，得上清液B和残渣B；

3）将残渣B重复步骤2），得上清液C和残渣C；

4）合并上清液A、B和C，去除甲醇，加入醋酸铵复溶后离心，得上清液D并纯化。

2.根据权利要求1所述从商陆愈伤组织诱导丛生芽的方法，其特征在于，所述方法进一步包括在步骤（1）之前，通过无菌的硝酸纤维素膜，对商陆顶芽提取物进行过滤消毒。

3.根据权利要求1所述从商陆愈伤组织诱导丛生芽的方法，其特征在于，所述冰浴研磨的环境为弱光环境。

4.根据权利要求1所述从商陆愈伤组织诱导丛生芽的方法，其特征在于，所述甲醇的浓度为70～90 (wt)%。

5.根据权利要求1所述从商陆愈伤组织诱导丛生芽的方法，其特征在于，所述浸提时间为10～20 h。

6.根据权利要求1所述从商陆愈伤组织诱导丛生芽的方法，其特征在于，所述漩涡振荡的时间为3～10 min。

7.根据权利要求1所述从商陆愈伤组织诱导丛生芽的方法，其特征在于，所述醋酸铵的浓度为0.05～0.2 mol/L。