[发明专利]乙肝病毒核酸的快速扩增方法

权利要求书

1.一种非疾病的诊断和治疗目的的乙肝病毒核酸的快速扩增方法，其特征在于，包括以下步骤：

将含有乙肝病毒的样品与核酸释放剂混合后加入PCR预混液得到反应液，所述核酸释放剂包括莎梵婷、氯化钾、十二烷基磺酸钠和乙醇，所述PCR预混液包括脱氧核糖核苷三磷酸、如SEQ No.1序列所示的上游引物、如SEQ No.2序列所示的下游引物、DNA聚合酶和扩增缓冲液；

将所述反应液置于PCR反应管中使所述反应液呈厚度小于等于0.1mm的薄膜状；

将所述PCR反应管置于PCR扩增仪中设定以下反应条件进行PCR扩增：预变性温度设为93～95℃，预变性时间设为60s，变性温度设为93～95℃，变性时间设为0s，退火延伸温度设为56～58℃，退火延伸时间设为0s。

2.根据权利要求1所述的乙肝病毒核酸的快速扩增方法，其特征在于，所述PCR反应管的容纳腔为厚度小于等于0.1mm的扁平状容纳腔。

3.根据权利要求1所述的乙肝病毒核酸的快速扩增方法，其特征在于，所述PCR预混液还包括如SEQ No.3序列所示的第一探针。

4.根据权利要求3所述的乙肝病毒核酸的快速扩增方法，其特征在于，还包括以下步骤：在所述退火延伸和所述变性之间的升温变化过程中进行荧光采集。

5.根据权利要求3所述的乙肝病毒核酸的快速扩增方法，其特征在于，所述PCR预混液还包括ROX参比染料。

6.根据权利要求3所述的乙肝病毒核酸的快速扩增方法，其特征在于，所述第一探针的羧基端用FAM荧光基团修饰，羟基端用BHQ1淬灭基团修饰。

7.根据权利要求3所述的乙肝病毒核酸的快速扩增方法，其特征在于，所述PCR预混液还包括如SEQ No.4序列所示的DNA插入到pUC18T载体而构成的内标和如SEQ No.5序列所示的第二探针。

8.根据权利要求7所述的乙肝病毒核酸的快速扩增方法，其特征在于，所述第二探针的羧基端用HEX荧光基团修饰，羟基端用DABCYL淬灭基团修饰。

9.根据权利要求1～8任一项所述的乙肝病毒核酸的快速扩增方法，其特征在于，所述核酸释放剂中，莎梵婷的浓度为0.01～0.5mmol/L，氯化钾的浓度为50～200mmol/L，十二烷基磺酸钠的浓度为0.01～2g/100mL，乙醇的浓度为0.05～1mL/100mL。