[发明专利]一种用于评估HPV16疫苗免疫效果的阻断ELISA试剂盒

说明书

本发明公开了一种特异性结合HPV16 E6蛋白的单克隆抗体及其应用。本发明还公开了应用本发明的单克隆抗体评估HPV16亚型疫苗免疫效果的试剂盒及其制备方法，该试剂盒采用阻断ELISA原理制备，有利于提高准确率，减少假阳性，为评估临床HPV16亚型疫苗免疫效果提供指导。

技术领域

本发明涉及生物检测领域，具体涉及一种检测HPV疫苗接种者体内HPV16免疫抗体含量的ELISA试剂盒，为疫苗免疫情况做指导。

背景技术

人乳头瘤病毒(Human papillomavirus，HPV)是一种属于乳多空病毒科(Papovaviridae)的乳头瘤空泡病毒A属，是球形DNA病毒，能引起人体皮肤黏膜的鳞状上皮增殖。表现为寻常疣、生殖器疣(尖锐湿疣)等症状。随着性病中尖锐湿疣的发病率急速上升和宫颈癌、肛门癌等的增多，HPV感染越来越引起人们的关注。但并不是所有的HPV基因型均诱发癌症，根据其亚型不同，可分为低危型和高危型两种。低危型HPV主要引起寻常疣、趾疣、扁平疣等，而高危型的HPV感染主要造成生殖器疣和宫颈癌。目前了解最深入的HPV致癌的范例是女性宫颈癌，2008年Harald zur Hausen因证明了HPV病毒是导致宫颈癌的病原体而获得了诺贝尔生理医学奖。

子宫颈癌是第二位常见女性恶性肿瘤，全球每年大约有50万女性被诊断为宫颈癌，其中超过半数的女性因此而死亡。几乎所有的宫颈癌的发生都是高危型HPV持续感染导致的，高危型HPV16型和18型与70％宫颈癌发病有关。令人欣慰的是，2006和2007年首先已由美国默克(Merck)和英国葛兰素史克(GSK)制药公司研制成功二种预防性四价和二价HPV疫苗，美国默沙东公司研制的九价预防性HPV也已于2018年4月28日在中国上市。

这些疫苗均包含来源于HPV早期蛋白(如，E6、E7)的抗原决定簇，这是因为E6和E7在HPV感染极大多数宫颈癌及癌前期病变中均持续表达，而在正常组织中不表达。同时，E6、E7的持续表达对诱导和维持癌细胞的恶性表型是必需的，癌细胞在抗原丢失中不太可能逃过免疫反应，动物实验结果表明，以乳头瘤病毒的早期蛋白为靶抗原的疫苗既能产生预防作用又能产生治疗作用。因此，E6、E7蛋白就成为抗原特异性治疗HPV慢性感染以及相关病变如宫颈癌疫苗的理想靶点，但是最近研究发现HPV早期蛋白E6诱发的免疫反应比E7蛋白更常见，而且具有更强的免疫原性。

目前HPV疫苗接连审批上市，实际应用中缺乏用于评估疫苗免疫效力的简便易行灵敏准确的血清学检测方法，即是以重组蛋白ELISA包被抗原，以高灵敏的抗HPV16单克隆抗体为竞争抗体建立阻断ELISA检测方法，从而鉴定HPV疫苗接种者血清中存在的抗体。至今未见血清学检测方法或Kit在临床检验中的实际应用。故本领域急需亲和力高、特异性强的抗HPV抗体及其试剂盒来通过检测疫苗免疫后个体血清中存在的抗体的量确定疫苗效价。

发明内容

针对现有技术存在的不足，本发明的目的在于提供一种针对HPV16 E6蛋白的单克隆抗体及应用其制备的用于检测HPV16中和抗体含量的ELISA试剂盒。

本发明的第一方面提供了一种特异性结合HPV16 E6蛋白的单克隆抗体，它由小鼠杂交瘤细胞系CCTCC NO：C2018153分泌。

本发明的第二方面提供了一种分泌本发明的单克隆抗体的小鼠杂交瘤细胞系CCTCC NO：C2018153。

本发明的第三方面提供了本发明的单克隆抗体在制备用于评估HPV16疫苗免疫效果的阻断ELISA试剂盒中的应用。

本发明的第四方面提供了一种用于评估HPV16疫苗免疫效果的阻断ELISA试剂盒，其中，所述试剂盒包含本发明的单克隆抗体，所述单克隆抗体用于检测HPV16疫苗接种者血液中抗HPV16免疫抗体的含量。