[发明专利]一种同型半胱氨酸检测试剂盒

说明书

本发明涉及体外诊断技术领域，尤其是一种同型半胱氨酸检测试剂盒，包括试剂R1、试剂R2，试剂R1组分为丝氨酸0.5‑20mmol/L、HCY还原剂0.5‑10mmol/L、NADH 0.5‑1.8g/L、LDH 10‑200KU/L、缓冲液20‑100mmol/L；试剂R2组分为胱硫醚β‑合成酶0.5‑10KU/L、胱硫醚β‑分解酶10‑50KU/L、缓冲液20‑100mmol/L。本试剂盒用于体外定量检测人血清中同型半胱氨酸(Hcy)的含量，Hcy与心血管疾病密切相关，是心血管疾病发病的一个重要危险因子，用于心血管疾病危险因素的辅助诊断，并指导临床治疗。具有稳定性好、使用方便、制备简单的优点。

技术领域

本发明涉及半胱氨酸检测技术领域，尤其涉及一种同型半胱氨酸检测试剂盒。

背景技术

同型半胱氨酸(又称高半胱氨酸，homocysteine,Hcy)是蛋氨酸代谢过程中的中间产物。同型半胱氨酸在体内的分解代谢，受两方面因素影响最大。一是与先天遗传有关的某些生物酶的缺乏，另一个就是体内叶酸、维生素B6、维生素B12等营养元素的缺乏。这两种缺乏都会影响同型半胱氨酸转化为其他物质，导致高同型半胱氨酸血症。Hcy的测定，对心血管疾病、尿毒症、动脉粥样硬化、糖尿病、老年痴呆症等疾病的判定中，有重要的临床意义。

通常认为成人空腹血浆总Hcy水平正常值为4～12μmol/L，理想值为<10μmol/L，高于15μmol/L则被认为是高同型半胱氨酸败血症；老年人(≥60岁)空腹血浆总Hcy水平正常值为15～20μmol/L，高于20μmol/L被认为是高同型半胱氨酸败血症。

目前，实验室常用的Hcy测定方法有色谱法、酶联免疫法、荧光偏振免疫法及酶循环法。色谱法具有特异性强、灵敏度高、重复性好等优点，现在公认其为测定血浆Hcy浓度的首选方法， 但因色谱法(HPLC及GC-MS)需要的设备复杂且昂贵，难以适应常规临床化学实验室应用；酶联免疫测定法自动化水平低，大部分需要手工操作，耗时较长，且容易造成误差；荧光偏振免疫检测 (FPIA) 方法灵敏度高，检测速度快，但价格昂贵，检测成本高，不适用常规生化检测；酶循环法是一种无需预处理样本，适用于全自动生化分析仪，具有快速、准确、灵敏的特点，因此受到临床广泛推广。但是普通的同型半胱氨酸检测试剂中由于存在多种酶，会使该试剂 的稳定性受到影响，不利于试剂的长期保存，从而造成浪费的不良后果。

发明内容

本发明的目的是为了解决现有技术中存在的缺点，而提出的一种同型半胱氨酸检测试剂盒。

为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：

设计一种同型半胱氨酸检测试剂盒，包括试剂R1、试剂R2，试剂R1组分丝氨酸0.5-20mmol/L、HCY还原剂0.5-10mmol/L、NADH 0.5-1.8g/L、LDH 10-200KU/L、缓冲液20-100mmol/L；试剂R2组分为胱硫醚β-合成酶0.5-10KU/L、胱硫醚β-分解酶10-50KU/L、缓冲液20-100mmol/L。

其使用方法：首先把结合或聚合状态的Hcy,包括复杂的二硫键的聚合状态的Hcy以及蛋白结合的Hcy还原成游离型的Hcy，然后游离型的Hcy与丝氨酸在胱硫醚合成酶（CBS）的作用下形成胱硫醚，形成的胱硫醚在胱硫醚裂解酶（CBL）的作用下形成Hcy、丙酮酸和氨，丙酮酸与NADH（辅酶）在乳酸脱氢酶（LDH）的作用下反应，NADH转化为NAD+在340nm下每分钟转化的速率直接与Hcy的浓度正相关。

优选的，缓冲液为Tris-HCl缓冲液、HEPES缓冲液、硼酸盐缓冲液、甘氨酸缓冲液、PBS缓冲液、MOPS缓冲液中的一种或几种按任意比组成的混合物，缓冲液的PH值为7.1-7.5。

优选的，试剂R1和R2中还加入有电解质，电解质为氯化钠、氯化钾或氯化钙，电解质的质量百分比为0.2-2％。