[发明专利]利用高效液相色谱-串联质谱法检测血浆中酮洛芬的方法及应用

说明书

本发明提供了一种利用高效液相色谱‑串联质谱法检测血浆中酮洛芬的方法及应用，涉及化学检测技术领域，本发明提供的利用高效液相色谱‑串联质谱法检测血浆中酮洛芬的方法，以酮洛芬‑D3为检测内标，采用内标标准曲线法定量。该方法专属性强，检测限低，并且，标准曲线的线性范围内的相关系数都大于0.999，表明在此线性范围内的线性关系良好，重复性高。此外，该方法还具有分析时间快，需样量少的优点，能够大大提高样品分析效率。综上，本发明提供的利用高效液相色谱‑串联质谱法检测血浆中酮洛芬的方法，整个操作过程简单易行，方法科学、可靠、可控，适于实际应用和推广，具有广阔的应用前景。

技术领域

本发明涉及化学检测技术领域，尤其是涉及一种利用高效液相色谱-串联质谱法检测血浆中酮洛芬的方法及应用。

背景技术

酮洛芬(Ketoprofen)又名酮基布洛芬，属于芳基丙酸群，非甾体类抗炎药。白色结晶性粉末，无臭或几乎无臭。在甲醇中极易溶，在乙醇、丙酮或乙醚中易溶，在水中几乎不溶。酮洛芬消炎作用强，副作用小，毒性低。其主要作用机理是通过抑制花生四烯酸的环氧化酶通路，从而导致炎症因子的减少，如前列腺素和血栓素。这种作用机理导致的结果是产生抗炎、解热和镇痛等效果。

目前在兽医上，酮洛芬使用越来越广泛，国外将其应用于猪、马、牛、山羊等。在牛上，酮洛芬可以用来治疗发热、疼痛和炎症等相关症状的疾病，包括乳腺炎、乳腺水肿、关节炎和肌肉骨骼外伤。

建立动物血浆中酮洛芬含量的检测方式，可以指导临床合理用药。而目前检测血浆中酮洛芬含量的方法主要有：滴定法、紫外可见分光光度法、高效液相色谱法(HPLC)等，其中国内外最常用的是高效液相色谱法 (HPLC)，但高效液相色谱法灵敏度不高，检测限的浓度高，检测时间长，需要样品量较大。同时，动物在注射酮洛芬24小时后，药物在动物血液中的含量均小于30ng/mL，这低于现有的高效液相色谱法的检测限度。

因此，开发一种快速、高效、灵敏度高的酮洛芬含量检测方式尤为重要。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的第一个目的在于提供一种利用高效液相色谱-串联质谱法检测血浆中酮洛芬的方法，以缓解现有技术中存在的检测方法灵敏度不高，检测限的浓度高，检测时间长，需要样品量较大的技术问题。

本发明的第二个目的在于提供上述利用高效液相色谱-串联质谱法检测血浆中酮洛芬的方法在指导酮洛芬用药中的应用。

本发明提供了一种利用高效液相色谱-串联质谱法检测血浆中酮洛芬的方法，所述方法以酮洛芬-D3为检测内标，采用内标标准曲线法定量。

进一步地，所述利用高效液相色谱-串联质谱法检测血浆中酮洛芬的方法包括：

提供酮洛芬标准溶液、酮洛芬内标溶液以及预处理后的待测样品，利用液相色谱-串联质谱仪对酮洛芬标准溶液和预处理后的待测样品分别进行检测，通过绘制标准曲线，得到血浆中酮洛芬的含量；

其中，将待测样品与酮洛芬内标溶液按体积比为10-30:1混合后的混合液进行沉淀蛋白处理，取上清稀释除杂后，得到所述预处理后的待测样品。

进一步地，将酮洛芬标准品用低碳醇溶解，制备浓度为0.1-2.0mg/mL 的酮洛芬醇溶液，得到所述酮洛芬标准溶液；

优选地，所述酮洛芬醇溶液的浓度为0.5-1.5mg/mL，优选为0.8-1.2 mg/mL；

优选地，所述低碳醇为C1-C4醇，优选为甲醇；

优选地，在避光条件下制备所述酮洛芬标准溶液。

进一步地，将酮洛芬-D3标准品用低碳醇溶解，制备浓度为0.1-2.0 mg/mL的酮洛芬-D3醇溶液，得到所述酮洛芬内标溶液；