[发明专利]利用高效液相色谱-串联质谱法检测血浆中酮洛芬的方法及应用

权利要求书

1.一种利用高效液相色谱-串联质谱法检测血浆中酮洛芬的方法，其特征在于，所述方法以酮洛芬-D3为检测内标，采用内标标准曲线法定量。

2.根据权利要求1所述的利用高效液相色谱-串联质谱法检测血浆中酮洛芬的方法，其特征在于，所述利用高效液相色谱-串联质谱法检测血浆中酮洛芬的方法包括：

提供酮洛芬标准溶液、酮洛芬内标溶液以及预处理后的待测样品，利用液相色谱-串联质谱仪对酮洛芬标准溶液和预处理后的待测样品分别进行检测，通过绘制标准曲线，得到血浆中酮洛芬的含量；

其中，将待测样品与酮洛芬内标溶液按体积比为10-30:1混合后的混合液进行沉淀蛋白处理，取上清稀释除杂后，得到所述预处理后的待测样品。

3.根据权利要求2所述的利用高效液相色谱-串联质谱法检测血浆中酮洛芬的方法，其特征在于，将酮洛芬标准品用低碳醇溶解，制备浓度为0.1-2.0mg/mL的酮洛芬醇溶液，得到所述酮洛芬标准溶液；

优选地，所述酮洛芬醇溶液的浓度为0.5-1.5mg/mL，优选为0.8-1.2mg/mL；

优选地，所述低碳醇为C1-C4醇，优选为甲醇；

优选地，在避光条件下制备所述酮洛芬标准溶液。

4.根据权利要求2所述的利用高效液相色谱-串联质谱法检测血浆中酮洛芬的方法，其特征在于，将酮洛芬-D3标准品用低碳醇溶解，制备浓度为0.1-2.0mg/mL的酮洛芬-D3醇溶液，得到所述酮洛芬内标溶液；

优选地，所述酮洛芬-D3醇溶液的浓度为0.5-1.5mg/mL，优选为0.8-1.2mg/mL；

优选地，所述低碳醇为C1-C4醇，优选为甲醇；

优选地，在避光条件下制备所述酮洛芬内标溶液。

5.根据权利要求2所述的利用高效液相色谱-串联质谱法检测血浆中酮洛芬的方法，其特征在于，将待测样品与酮洛芬内标溶液按体积比为10-30:1混合后的混合液静置，再加入乙腈进行蛋白沉淀；

优选地，所述乙腈与酮洛芬内标溶液的体积比为15-25:1，优选为18-22:1，更优选为18-20:1；

优选地，在避光条件下静置。

6.根据权利要求2所述的利用高效液相色谱-串联质谱法检测血浆中酮洛芬的方法，其特征在于，取一系列不同浓度的酮洛芬标准溶液加入空白血浆样品中，经预处理后，利用液相色谱-串联质谱仪进行检测，并分别记录每个浓度的酮洛芬对应的峰面积，以酮洛芬与内标峰面积比值Y为纵坐标，以酮洛芬浓度X为横坐标，绘制所述标准曲线。

7.根据权利要求1-6任一项所述的利用高效液相色谱-串联质谱法检测血浆中酮洛芬的方法，其特征在于，高效液相色谱条件如下：

色谱柱：Agilent RS-C18色谱柱；和/或，

柱温：30-50℃；和/或，

流动相：A相为0.1％(V/V)的甲酸溶液，B相为乙腈；和/或，

流速：0.1-1.0mL/min；和/或，

进样量：1-10μL；和/或，

线性梯度洗脱程序：起始比例A相为87％，B相为13％，维持1min；1-1.5min，A相降至10％，B相升至90％，维持至7.5min；7.5-8min，A相升至87％，B相降至13％，维持至12.0min。

8.根据权利要求1-6任一项所述的利用高效液相色谱-串联质谱法检测血浆中酮洛芬的方法，其特征在于，质谱条件如下：

离子源：ESI；和/或，

干燥气温度：300-400℃；和/或，

干燥气流量：5-15L/min；和/或，

雾化气压力：30-50psi；和/或，

毛细管电压：3500-4500V；和/或，

检测模式：正离子扫描的多反应检测模式。

9.根据权利要求8所述的利用高效液相色谱-串联质谱法检测血浆中酮洛芬的方法，其特征在于，所述酮洛芬和酮洛芬-D3的质谱参数见下表：

注：*标注的子离子为定量离子。

10.如权利要求1-9任一项所述的利用高效液相色谱-串联质谱法检测血浆中酮洛芬的方法在指导酮洛芬用药中的应用。