[发明专利]一种异嗜性小鼠白血病病毒的特异性引物及检测方法

说明书

本发明涉及一种异嗜性小鼠白血病病毒的特异性引物及检测方法，特异性引物包括逆向引物5’‑CACTGGAGACCGAGGAATCAT‑3’。检测方法包括如下步骤：根据X‑MuLV病毒基因组序列设计特异性引物，特异性引物包括正向引物5’‑GACAGGACAAACAGCTAACGC‑3’、逆向引物为5’‑CACTGGAGACCGAGGAATCAT‑3’；提取生物制品中的总RNA；根据逆向引物和总RNA进行逆转录；以逆转录产物为模板，以正向引物和逆向引物进行PCR扩增；取扩增产物进行凝胶电泳获得检测结果。本发明能够快速实时检测生物制品中的异嗜性小鼠白血病病毒，耗时约3小时，检测效果明显提高。

技术领域

本发明属于生物医药领域，具体涉及一种异嗜性小鼠白血病病毒的特异性引物及检测方法。

背景技术

目前重组融合类生物制品一般是以中国仓鼠卵巢细胞（CHO）作为表达载体，CHO细胞内本身可能存在内源性逆转录病毒，如异嗜性小鼠白血病病毒（X-MuLV）。虽然该病毒对人类不具有致病性，但仍有潜在的风险。现国内对于X-MuLV检测的研究报道较少，目前检测X-MuLV的方法主要有病毒感染性试验、酶联免疫吸附试验（ELISA）和聚合酶链反应法（PCR）等方法。病毒感染性试验存在检测周期长且步骤繁琐等缺陷；ELISA方法容易导致假阴性且成本高；PCR技术由于具有较高的灵敏度和特异性，对工作人员的要求低，费用低，能广泛普及。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种能够快速、灵敏检测生物制品中的X-MuLV的特异性引物。

本发明的另一个目的是提供一种能够快速、灵敏检测生物制品中的X-MuLV的检测方法。

为解决以上技术问题，本发明采用如下技术方案：

本发明的一个目的是提供一种异嗜性小鼠白血病病毒的特异性引物，所述的特异性引物包括逆向引物，所述的逆向引物为5’-CACTGGAGACCGAGGAATCAT-3’。

优选地，所述的特异性引物还包括正向引物，所述的正向引物为5’-GACAGGACAAACAGCTAACGC-3’。

本发明的另一个目的是提供一种异嗜性小鼠白血病病毒的检测方法，包括如下步骤：

（1）根据X-MuLV病毒基因组序列设计特异性引物，所述的特异性引物包括正向引物和逆向引物，所述的正向引物为5’-GACAGGACAAACAGCTAACGC-3’， 所述的逆向引物为5’-CACTGGAGACCGAGGAATCAT-3’；

（2）提取生物制品中的总RNA；

（3）根据步骤（1）设计逆向引物和步骤（2）提取的总RNA进行逆转录；

（4）以步骤（3）得到的逆转录产物为模板，以步骤（1）设计的正向引物和逆向引物进行PCR扩增；

（5）取步骤（4）得到的扩增产物进行凝胶电泳获得检测结果。

优选地，所述的生物制品为重组融合类生物制品、单克隆抗体或生物组织提取制品。

优选地，步骤（4）中进行所述的PCR扩增的扩增条件：94℃预变性5min；94℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸1min，30个循环；72℃总延伸10min；4℃保存。

优选地，所述的扩增产物的长度为345bp。

优选地，所述的凝胶电泳采用琼脂糖凝胶电泳。

本发明中总RNA的提取、逆转录的进行以及PCR的扩增体系等均采用本领域的常规方法。

由于以上技术方案的实施，本发明与现有技术相比具有如下优势：