[发明专利]一种多排高通量聚丙烯酰胺凝胶、电泳系统及电泳方法

说明书

本发明提供了一种多排的高通量水平连续电泳聚丙烯酰胺凝胶、电泳系统及电泳方法，包括：凝胶缓冲液和分离凝胶；凝胶缓冲液包括电泳阳离子和电泳阴离子；电泳阳离子的浓度为25mM‑200mM；电泳阴离子的浓度为25mM‑200mM。通过使用上述的聚丙烯酰胺凝胶以及连续电泳系统，可以同时检测的蛋白样品数多达几百个，上样量可低至0.4μl，蛋白样品分子量在12kDa‑130kDa范围内均可以进行有效性分离，获得可以接受的较高的条带分辨率和各个水平排电泳迁移的一致性，上述的聚丙烯酰胺凝胶及其连续电泳系统可与现有常规的水平电泳设备兼容，凝胶染色或者免疫印迹检测方法与常规方法一致，具有广泛的应用性。

技术领域

本发明属于生物检测分析领域，具体涉及一种多排的高通量水平连续电泳聚丙稀酰胺凝胶、电泳系统及电泳方法。

背景技术

蛋白质作为生物体的基本组成物质，是各个生命过程的功能执行者。对于蛋白质种类以及含量的分析检测，在基础研究和临床诊断上均具有很重要的意义和价值。其中蛋白质凝胶电泳技术是应用于蛋白质分析测定的最普及和最有效的方法，在电泳时，添加导电缓冲液并且施加一定强度的电场，蛋白质样品在具有不同孔径的凝胶介质中进行迁移，不同的蛋白质迁移速率不同从而得到分离，是进一步进行蛋白质分析检测的基础。

蛋白质凝胶电泳最常用的系统是以网状结构的聚丙烯酰胺凝胶为支持介质的聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)。一般与蛋白质变性剂十二烷基磺酸钠(SDS)共同使用，即SDS-PAGE。结合十二烷基磺酸钠(SDS)之后的不同的蛋白质样品，均会带有均匀密度的负电荷，并且发生变性呈现长杆状，在电场作用下，依据其不同的分子量，在聚丙烯酰胺凝胶中以不同的速度进行迁移从而得到分离，进一步通过染色或者特异的免疫印迹方法等来检测位于不同迁移位置的蛋白质样品条带，从而进行蛋白质种类或者含量的分析。为了得到较高的分离分辨率，聚丙烯酰胺凝胶通常由两种不同浓度的下层分离胶和上层浓缩胶共同组成，凝胶在两块玻璃或者塑料板中进行垂直配制，配好后进行垂直电泳。同时常用的凝胶电泳系统均为不连续缓冲系统，即最初凝胶缓冲液中的阴离子不同于(或者不连续)电泳缓冲液中最初的阴离子。最常用的凝胶电泳缓冲液系统为Laemnli缓冲系统(Laemmli,1970,Nature 227,680-686)，分离胶由pH 8.8的0.375M三羟甲基氨基甲烷(Tris)组成，浓缩胶由pH 6.8的0.125M三羟甲基氨基甲烷(Tris)组成，阳极和阴极电泳缓冲液由0.025M Tris、0.25M甘氨酸、0.1％SDS组成。制样缓冲液通常含有由盐酸(HCl)滴定到pH 6.8的三羟甲基氨基甲烷(Tris)、十二烷基磺酸钠(SDS)、甘油、示踪染料和(或)还原剂组成。

SDS-PAGE提供了一种可靠的方法来分析蛋白质分子量的大小、含量以及组成。目前，上述通用的SDS-PAGE凝胶电泳系统，由于其垂直的配胶形式以及不连续的缓冲系统，导致一块常规尺寸的凝胶(8cm×10cm)能够同时检测的蛋白质样品数量非常有限，由于只能电泳一横排样品，因此一块胶可以同时检测的样品数目一般不超过20个。目前通用的凝胶电泳系统通量低的缺点严重限制了凝胶电泳在蛋白质定量(需要重复样品、标准样品)、多个样品平行比较、大规模筛选和检测方面的应用，因此也较难满足科研和临床检测的需要。