[发明专利]一种利用中压液相色谱从桑葚中制备矢车菊素-3-葡萄糖苷的方法

说明书

本发明属于分离纯化领域，公开了一种利用中压液相色谱从桑葚中制备矢车菊素‑3‑葡萄糖苷的方法。该方法包括以下步骤：向桑葚果干中加入酸化的乙醇水溶液打浆并超声辅助浸提，浸提液经浓缩、萃取除杂后再浓缩，将所得浓缩液过大孔吸附树脂柱进行粗分离，将粗分离后的产物经中压液相制备柱进行纯化，经切割收集制备得到纯度在97％以上的矢车菊素‑3‑葡萄糖苷(C3G)。该方法不仅单次上样量大(达4g)，更为重要的是首次通过该技术及相应中压制备柱纯化得到了高纯度的单体花色苷，且耗时较短，成本低廉(使用分析纯试剂)，重复性好，可在一天内稳定完成2‑3次纯化，每次可收集到约0.5个柱体积C3G单体溶液，更加适用于单体花色苷的大量制备以及产业化生产。

技术领域

本发明属于分离纯化领域，特别涉及一种利用中压液相色谱从桑葚中制备矢车菊素-3-葡萄糖苷的方法。

背景技术

花色苷作为一类天然色素，其不仅安全、无毒、来源广泛，更为重要的是其具有的生物学价值。近些年来随着花色苷研究的逐渐深入，对单体花色苷的需求也快速增长，但目前市面上单体花色苷的售价相当昂贵，这主要是因为富含花色苷的原料比较单一以及提取、分离尤其是纯化花色苷的成本太高。

桑葚为桑科植物桑树的果穗，其营养丰富，含有葡萄糖、果糖、亚油酸以及多种氨基酸、维生素和矿质元素等，既可入食，也可入药，具有多种功效，被誉为“二十一世纪的最佳保健果品”。桑葚是为数不多的几种花色苷含量非常丰富的浆果之一，研究表明，成熟桑葚每100g可食用部分总花色苷可达185mg，远高于众多其它果蔬，而其作为一种种植广泛且产量可观的鲜果，又极不耐储藏和运输，这使得桑葚成为一种优良的花色苷提取潜在原料；此外众多研究发现桑葚中最主要的花色苷为矢车菊素-3-葡萄糖苷，含量可占到桑葚总花色苷的60％以上，这也更加证明以桑葚作为提取原料能够在很大程度上满足大量制备、生产单体花色苷的需求。

现有公开文本CN100439384A、CN101987856B、CN102229632B、CN104483431B涉及到的纯化制备矢车菊素-3-葡萄糖苷的方法主要为凝胶色谱法、高速逆流色谱法、半制备高效液相色谱法等，但以上方法均存在单次纯化处理量低、成本较高、耗时较长等不同缺点，很难在较短时间内快速制备出大量的单体花色苷，具有一定的局限性。

为了能够快速大量获取单体花色苷，有必要研究更加适合批量制备和工业化生产的纯化制备技术。

发明内容

为了克服上述现有技术的缺点与不足，本发明的首要目的在于提供一种利用中压液相色谱从桑葚中制备矢车菊素-3-葡萄糖苷的方法。

本发明的目的通过下述方案实现：

一种利用中压液相色谱从桑葚中制备矢车菊素-3-葡萄糖苷的方法，主要包括以下步骤：向桑葚果干中加入酸化的乙醇水溶液打浆并超声辅助浸提，浸提液经浓缩、萃取除杂后再浓缩，将所得浓缩液过大孔吸附树脂柱进行粗分离，将粗分离后的产物经中压液相制备柱进行纯化，经切割收集制备得到纯度在97％以上的矢车菊素-3-葡萄糖苷(C3G)。

从桑葚中制备矢车菊素-3-葡萄糖苷的工艺路线图如图1所示。

上述的从桑葚中制备矢车菊素-3-葡萄糖苷的方法，具体包括以下步骤：

(1)花色苷提取：将桑葚果干去蒂部洗净后，向去蒂的桑葚果干中加入酸化乙醇水溶液打浆，所得浆液经超声处理后静置过夜，然后过滤收集提取液，将提取液减压旋蒸浓缩再加入石油醚进行萃取，取下层水层并减压旋蒸除去石油醚，得浓缩液；

(2)粗分离：将步骤(1)中的浓缩液加入到大孔吸附树脂柱中，待浓缩液中的红色静止吸附在柱子中时，用酸性溶液除杂，再用乙醇溶液进行洗脱并收集深色洗脱液，深色洗脱液经浓缩至无醇味后冷冻干燥得花色苷粗分离粉末；