[发明专利]一种利用中压液相色谱从桑葚中制备矢车菊素-3-葡萄糖苷的方法

权利要求书

1.一种利用中压液相色谱从桑葚中制备矢车菊素-3-葡萄糖苷的方法，其特征在于包括以下步骤：向桑葚果干中加入酸化的乙醇水溶液打浆并超声辅助浸提，浸提液经浓缩、萃取除杂后再浓缩，将所得浓缩液过大孔吸附树脂柱进行粗分离，将粗分离后的产物经中压液相制备柱进行纯化，经切割收集制备得到纯度在97％以上的矢车菊素-3-葡萄糖苷；

具体包括以下步骤：

(1)花色苷提取：将桑葚果干去蒂部洗净后，向去蒂的桑葚果干中加入酸化乙醇水溶液打浆，所得浆液经超声处理后静置过夜，然后过滤收集提取液，将提取液减压旋蒸浓缩再加入石油醚进行萃取，取下层水层并减压旋蒸除去石油醚，得浓缩液；

(2)粗分离：将步骤(1)中的浓缩液加入到大孔吸附树脂柱中，待浓缩液中的红色静止吸附在柱子中时，用酸性溶液除杂，再用乙醇溶液进行洗脱并收集深色洗脱液，深色洗脱液经浓缩至无醇味后冷冻干燥得花色苷粗分离粉末；

(3)装柱：选用粒径为20-45μm的反向C¹⁸填料，将其倒入100％甲醇中，充分混匀后装入长度在100cm以上，直径在4cm以上且长径比为15:1-25:1的中压制备玻璃柱同时抽真空，待整个柱体积装填完成后连接保护柱并继续装填至填料高度到达保护柱1/3-2/3处，之后采用100％甲醇流动相进行柱体压实；

(4)柱纯化：取步骤(2)中冷冻干燥后的花色苷粗分离粉末，溶于酸化甲醇水溶液中，然后上步骤(3)中的中压液相色谱柱，用流动相进行梯度洗脱，根据所得洗脱液的色谱图采用切割收集法进行洗脱液收集，将收集的洗脱液经减压旋蒸得目标产物。

2.根据权利要求1所述的利用中压液相色谱从桑葚中制备矢车菊素-3-葡萄糖苷的方法，其特征在于：

步骤(1)中所述的酸化乙醇水溶液为乙醇体积分数为60-80％、三氟乙酸的体积分数为0.1-0.5％的三氟乙酸酸化的乙醇水溶液；

步骤(1)中所述的酸化乙醇水溶液的用量满足每1kg的去蒂后的桑葚果干对应加入8-12L的酸化乙醇水溶液；

步骤(1)中所述的打浆是指用打浆机将桑葚果干完全破碎使之呈浆液形式；

步骤(1)中所述的超声处理是指在38-45℃、200-500w功率下超声处理30-60min；

步骤(1)中所述的加入石油醚萃取是指加入浓缩液1/3-2/3体积的低沸程石油醚萃取，避光静置4-6h后再收集下层水相。

3.根据权利要求1所述的利用中压液相色谱从桑葚中制备矢车菊素-3-葡萄糖苷的方法，其特征在于：

步骤(2)中所述的大孔吸附树脂柱填料为Amberlite XAD-7型树脂。

4.根据权利要求1所述的利用中压液相色谱从桑葚中制备矢车菊素-3-葡萄糖苷的方法，其特征在于：

步骤(2)中所述的将浓缩液加入到大孔吸附树脂柱中是指以70-100mL/min的流速加入；

步骤(2)中所述的酸性溶液为体积分数为0.1％-0.2％的盐酸溶液，所述的酸性溶液的用量满足酸性溶液的体积为大孔吸附树脂柱体积BV的两倍，所述的酸性溶液的进样速度为1-1.5BV/h；

步骤(2)中所述的乙醇溶液为体积分数为80％-90％的乙醇水溶液；所述的乙醇溶液的进样速度为1-1.5BV/h。

5.根据权利要求1所述的利用中压液相色谱从桑葚中制备矢车菊素-3-葡萄糖苷的方法，其特征在于：

步骤(4)中所述的酸化甲醇水溶液为甲醇体积分数为5％-8％、三氟乙酸的体积分数为0.1％-0.5％的三氟乙酸酸化的甲醇水溶液；

步骤(4)中所述的酸化甲醇水溶液的用量满足每1g的冷冻干燥后的花色苷粗分离粉末对应溶于5-10mL的酸化甲醇水溶液。