[发明专利]测定脂蛋白相关磷脂酶A2的免疫层析检测试剂盒及其制备方法

说明书

本发明涉及一种测定脂蛋白相关磷脂酶A2的免疫层析检测试剂盒，其由免疫层析试纸条和塑料外壳，所述免疫层析试纸条是由底板、样品垫、试剂垫、硝酸纤维素膜和吸收垫组成的试纸条，所述样品垫、试剂垫、硝酸纤维素膜和吸收垫依次交错固定于所述底板上，所述试剂垫包被有鼠抗人Lp‑PLA2单克隆抗体标记的彩色荧光微球，硝酸纤维素膜上的检测线包被有鼠抗人Lp‑PLA2单克隆抗体，质控线包被有山羊抗鼠多克隆抗体，该试剂盒定性测定分界线浓度为200ng/ml，荧光免疫分析仪检测灵敏度为10ng/ml，线性范围为10‑1000ng/ml，采用彩色荧光微球可以快速得到定性结果并稍迟得到定量结果，具有操作简单、反应迅速、灵敏度高、可定性可定量等特点，有助于满足不同检验场景的需求。

技术领域

本发明涉及医学免疫学中免疫层析技术领域，具体地说是一种能够快速准确的对Lp-PLA2进行同时定性和定量分析的测定脂蛋白相关磷脂酶A2的免疫层析检测试剂盒。

背景技术

随着对动脉粥样硬化发病机制的深入研究，人们发现在动脉粥样硬化发生、发展的演变过程中，始终都有各种炎症细胞核大量炎症介质的参与，炎症是动脉粥样硬化发展过程中的核心因素。Lp-PLA2是近年来引起广泛关注的一种与动脉粥样硬化心、脑血管疾病密切相关的磷脂酶A2超家族，越来越多的研究表明Lp-PLA2与冠状动脉粥样硬化性心脏病(冠心病)脑卒中事件的发生关系密切。Lp-PLA2是针对血管内皮炎症即AS严重程度的特异性炎症标记物，可以有效预警、评估心脑血管栓塞性疾病的发生风险，降低心脑血管患者或高危人群突发心梗/脑梗等严重不良事件的发生率，为生命保驾护航。

脂蛋白相关磷脂酶A2(Lp-PLA2)是目前国际上公认的一种新的炎性反应标志物。血液中的Lp-PLA2主要由巨噬细胞产生，能水解低密度脂蛋白(LDL)中氧化的磷脂，其水解产物可促进动脉粥样硬化过程，为反映血管炎症的特异性标志物。Lp-PLA2水平升高还与动脉粥样硬化斑块的破溃相关，因而可用于动脉粥样斑块不稳定性评价。Lp-PLA2水平升高是预测冠心病、心血管事件和卒中风险的一种独立危险因素和预测因子。

Lp-PLA2检测方法主要有定量检测方法和定性检测方法，定量检测方法有双抗夹心法(ELISA)、化学发光法、胶乳颗粒增强免疫比浊法、免疫荧光法等，定性方法主要有胶体金免疫层析法。定量方法普遍需要昂贵的仪器，并且获得结果时间都偏长，而Lp-PLA2检测相关的心肌梗死、心衰等疾病迫切需要尽快获得检测结果；而现有的定性检测虽然可以用时较短，但是定性结果容易存在偏差，获得阳性结果的时候也无法获得病情的严重程度。如何能够解决快速获得结果用于心肌梗死等时效性强的诊治以及获得定量结果确定后期的针对性治疗，是目前临床诊断产品研究领域亟需解决的重要问题。

发明内容：

本发明针对现有检测产品存在的缺点和不足，提出了一种结合了用彩色微球快速定性和荧光微球准确定量的优点，既能满足只需定性但是要求出结果尽可能快，或者缺乏仪器、没有电源等特殊检验场景的需求，又能结合荧光免疫层析分析仪实现需要灵敏度高、准确定量的测定Lp-PLA2指标的测定Lp-PLA2的荧光免疫层析检测试剂盒及其制备方法。

本发明可以通过以下措施达到：

一种测定脂蛋白相关磷脂酶A2的免疫层析检测试剂盒，由免疫层析试纸条和塑料外壳组成，所述免疫层析试纸条是由底板、样品垫、试剂垫、硝酸纤维素膜和吸收垫组成，所述样品垫、试剂垫、硝酸纤维素膜和吸收垫依次交错固定于所述底板上，所述试剂垫包被有鼠抗人Lp-PLA2单克隆抗体标记的彩色荧光微球，硝酸纤维素膜上的检测线包被有鼠抗人Lp-PLA2单克隆抗体，质控线包被有山羊抗鼠多克隆抗体。

本发明所述试剂垫的彩色荧光微球的直径范围是180-200nm；所述彩色荧光微球掺杂有稀土镧系元素，为铕(Eu)、钐(Sm)、铒(Er)、钕(Nd)等镧系元素的任意一种或几种的混合物；所述彩色荧光微球掺杂的彩色染料含有氨基或者羟基官能团，为酸性紫1、酸性紫7、酸性蓝25、分散红58中的任意一种或几种的混合物。