[发明专利]一种在低氧条件下体外扩增人血管内皮祖细胞的方法

说明书

本发明提供了一种在低氧条件下体外扩增人血管内皮祖细胞的方法，包括从人骨髓中分离出EPCs，并在低氧条件下于培养箱中培养，其中，所述低氧条件为1％O₂的低氧条件；所述低氧条件对EPCs基因表达包括多种基因的差异表达，并至少涉及以下生物过程：细胞对脂肪酸的反应、调节有丝分裂细胞周期转变的泛素‑蛋白连接酶活性的正调控等。本发明的培养方法相比于常氧培养，低氧环境与骨髓微环境更为相似，更有利于EPCs保持其原有的特性；本发明对不同培养方法导致的EPCs中基因表达的改变进行分子水平的评价，给出了低氧或缺氧条件对细胞干性影响的差异表达基因与差异表达基因的分子途径，并用于改善目前的干细胞的培养方法。

技术领域

本发明属于医药生物领域，具体涉及一种在低氧条件下体外扩增人血管内皮祖细胞的方法。

背景技术

骨髓含有能够迁移到外周血并分化成为成熟内皮细胞的祖细胞，被称为血管内皮祖细胞(Endothelial progenitor cells，EPCs)，其为血管内皮细胞的前体细胞，主要存在于脐带血、成人外周血、骨髓。内皮祖细胞与造血干细胞来自共同的中胚层前体细胞血液血管母细胞，在生理或病理因素刺激下，可以从骨髓动员到外周血中参与损伤血管的修复，而脐血中的内皮祖细胞起源于胎儿的肝脏。近年来的研究显示血管内皮祖细胞(EPCs)已被证明对多种血管病变有治疗作用，在心脑血管疾病、外周血管疾病、肿瘤血管形成及创伤愈合等方面均发挥重要作用，例如：a.促进血管新生的作用，改善脏器缺血导致的功能障碍，EPCs的体内回输可用来治疗人体缺血性疾病：如缺血性心脏病、脑缺血、肾缺血、肢端缺血坏死等一系列疾病，尤其将在心肌梗死、心绞痛等缺血性心脏病的治疗过程中起到巨大作用；b.帮助修复损伤的血管内膜，如经皮冠状动脉腔内成形术(PTCA)和其他血管的介入手术不可避免的多少会损伤血管内膜，EPCs的回输将促进损伤内膜的修复，减少因内膜损伤而导致的介入术后的血管再狭窄；c.帮助恢复和重建动脉粥样硬化的血管内皮功能，防止动脉粥样硬化的进一步恶化，减少心肌梗死的发生；d.在肿瘤学方面，通过研究EPCs在肿瘤血管生成过程中的作用，采取相应的抑制措施，为抑制肿瘤血管生成以及抑制肿瘤生长开辟新途径。同时，因其可分化为表达FVIII的血管内皮细胞，可作为一种细胞治疗途径用于FVIII缺乏的甲型血友病。

但是由于能从骨髓中分离的EPCs极少，所以有必要进行体外扩增。EPCs位于骨髓的低氧微环境中。然而，基本上所有的EPCs的研究都是在非生理环境空气中处理的细胞进行的。而且，虽然内皮祖细胞的培养技术可以获得一定数量供科研需要，但还无法实现较大规模生产的需求，并且不能充分保持祖细胞的干性。因此，本领域亟待提高扩增的效率并同时保留祖细胞的干性。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种在低氧条件下体外扩增人血管内皮祖细胞的方法，包括从人骨髓中分离出EPCs，并在低氧条件下于培养箱中培养。

优选地，本发明所述的扩增人血管内皮祖细胞的方法中，所述低氧条件为1％O₂的低氧条件。

优选地，本发明所述的扩增人血管内皮祖细胞的方法中，所述培养EPCs的培养基为EBM-2培养基。

优选地，本发明所述的扩增人血管内皮祖细胞的方法中，所述培养EPCs的时间为21天左右。