[发明专利]可视化鉴别口蹄疫病毒和蓝舌病病毒的二重荧光RT-LAMP检测组、试剂盒及其应用

说明书

本发明公开了一种可视化鉴别口蹄疫病毒和蓝舌病病毒的二重荧光RT‑LAMP检测组、试剂盒及其应用，该二重荧光RT‑LAMP检测组包括2组特异性引物和探针，其中第一组特异性引物和探针包括FMDV‑F3，FMDV‑B3，FMDV‑FIP(F1c‑F2)，FMDV‑BIP(B1c‑B2)，和FMDV‑探针，第二组特异性引物和探针包括BTV‑F3，BTV‑B3，BTV‑FIP(F1c‑F2)，BTV‑BIP(B1c‑B2)和BTV‑探针，所述2组特异性引物和探针依次如序列表SEQ ID No.1至SEQ ID No.10所示，该二重荧光RT‑LAMP检测组能够在同一反应管里鉴别诊断口蹄疫病毒和蓝舌病病毒，具有特异性好、敏感性高、污染小、方便快捷等优点，并且检测结果可直接用肉眼观察，根据反应产物颜色判断结果，可应用于条件简陋的基层检疫。

技术领域

本发明是关于牛病毒检测技术领域，特别是关于一种可视化鉴别口蹄疫病毒和蓝舌病病毒的二重荧光RT-LAMP检测组、试剂盒及其应用。

背景技术

口蹄疫是由口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease，FMDV)引起的偶蹄类动物共患的急性高度接触性传染病，具有传播广、发病急、危害大等流行病学特点，主要感染牛、猪、羊和骆驼等个20科的70多种家养和野生哺乳动物。蓝舌病是由蓝舌病病毒(Bluetonguevirus,BTV)引起的反刍动物非接触性传染病，可通过库蠓等昆虫染感宿主，主要感染绵羊、牛及野生反刍动物。两种病毒感染动物均表现为体温升高，精神沉郁，口腔黏膜、乳头和蹄部出现水泡溃烂，症状相似，难以区分。被世界动物卫生组织(OIE)列为法定报告的动物疫病，在中国被列为一类动物疫病。FMDV一旦暴发，只能通过屠宰和集体焚毁的方式进行处理，BTV一般呈隐性感染，但在我国多个省份广泛存在，时时危害着畜牧业的健康发展。

LAMP是2000年Notomi等人开发出的一种新型核酸扩增方法，恒温扩增，操作简便，反应快速，成本低，已广泛应用在疾病诊断和基因筛选中。但LAMP由于其结果判定方法的局限(浊度，颜色，加染料)，多重LAMP方法一直未有较大进展。虽然目前国内外多位学者已建立了多重LAMP检测方法，但这些方法都有一定的不足：只能检测样品是否带病，但不能确定具体是哪一种病原引起的结果。

公开于该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不应当被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

发明内容

本发明的目的在于提供一种可视化鉴别口蹄疫病毒和蓝舌病病毒的二重荧光RT-LAMP检测组、试剂盒及其应用，其能够在同一反应管里鉴别诊断口蹄疫病毒和蓝舌病病毒，敏感性高、污染小，可以用肉眼直接观察反应产物颜色判断结果。

为实现上述目的，本发明提供了一种可视化鉴别口蹄疫病毒和蓝舌病病毒的二重荧光RT-LAMP检测组，其选用口蹄疫病毒的3D基因和蓝舌病病毒的NS3基因作为靶区域，设计2组特异性引物和探针，其中第一组特异性引物和探针包括FMDV-F3，FMDV-B3，FMDV-FIP(F1c-F2)，FMDV-BIP(B1c-B2)，以及FMDV-探针，第二组特异性引物和探针包括BTV-F3，BTV-B3，BTV-FIP(F1c-F2)，BTV-BIP(B1c-B2)，以及BTV-探针，所述2组特异性引物和探针依次如序列表SEQ ID No.1至SEQ ID No.10所示，即，FMDV-F3、FMDV-B3、FMDV-FIP(F1c-F2)、FMDV-BIP(B1c-B2)、FMDV-探针、BTV-F3、BTV-B3、BTV-FIP(F1c-F2)、BTV-BIP(B1c-B2)、BTV-探针依次如序列表SEQ ID No.1至SEQ ID No.10所示。

在一优选的实施方式中，特异性引物FMDV-FIP(F1c-F2)，FMDV-BIP(B1c-B2)，BTV-FIP(F1c-F2)和BTV-BIP(B1c-B2)为内引物，特异性引物FMDV-F3，FMDV-B3，BTV-F3和BTV-B3为外引物。