[发明专利]可视化鉴别口蹄疫病毒和蓝舌病病毒的二重荧光RT-LAMP检测组、试剂盒及其应用有效
| 申请号： | 201810700142.7 | 申请日： | 2018-06-29 |
| 公开（公告）号： | CN108796131B | 公开（公告）日： | 2020-10-20 |
| 发明（设计）人： | 谢芝勋;范晴;谢志勤;谢丽基;黄娇玲;熊文婕;张艳芳;曾婷婷;王盛;罗思思 | 申请（专利权）人： | 广西壮族自治区兽医研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11 |
| 代理公司： | 南宁市吉昌知识产权代理事务所(普通合伙) 45125 | 代理人： | 李秋琦 |
| 地址： | 530001 广西*** | 国省代码： | 广西;45 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 可视化 鉴别 口蹄疫病毒 蓝舌病 病毒 二重 荧光 rt lamp 检测 试剂盒 及其 应用 | ||
1.一种可视化鉴别口蹄疫病毒和蓝舌病病毒的二重荧光RT-LAMP检测组，其特征在于，包括两组特异性引物和探针，其中第一组特异性引物和探针包括FMDV-F3，FMDV-B3，FMDV-FIP，FMDV-BIP，以及FMDV-探针，第二组特异性引物和探针包括BTV-F3，BTV-B3，BTV-FIP，BTV-BIP，以及BTV-探针，所述2组特异性引物和探针依次如序列表SEQ ID No.1至SEQ IDNo.10所示；
特异性引物FMDV-FIP，FMDV-BIP，BTV-FIP和BTV-BIP为内引物，特异性引物FMDV-F3，FMDV-B3，BTV-F3和BTV-B3为外引物；
所述FMDV-探针和BTV-探针均设计在F1c和B1c基因序列之间;
所述FMDV-探针的5’端标记FAM荧光基团，3’端标记BHQ1淬灭基团，该FAM荧光基团在520 nm波长下呈黄绿色；所述BTV-探针的5’端标记CY 5.5荧光基团，3’端标记BHQ2淬灭基团，该CY 5.5荧光基团在694 nm波长下呈大红色。
2. 一种可视化鉴别口蹄疫病毒和蓝舌病病毒的二重荧光RT-LAMP检测试剂盒，其特征在于，包括以下反应体系：RNA模板，2×缓冲液，MgSO4，(NH4)2SO4，吐温 20，甜菜碱，dNTPs，酶溶液，以及权利要求1中所述的两组特异性引物和探针。
3. 如权利要求2所述的可视化鉴别口蹄疫病毒和蓝舌病病毒的二重荧光RT-LAMP检测试剂盒，其特征在于，包括以下25μL的反应体系：2µL RNA模板，2×缓冲液12.5 µL，100mMKCl，80mM MgSO4，100mM (NH4)2SO4，1%吐温20，8M甜菜碱，14mM dNTPs，酶溶液 1µL，内引物各40pmol，外引物各5pmol，探针各0.1 µM，加双蒸水补足至25µL。
4.如权利要求2或3所述的可视化鉴别口蹄疫病毒和蓝舌病病毒的二重荧光RT-LAMP检测试剂盒，其特征在于，所述2×缓冲液的成分为Tris–HCl，该Tris–HCl的浓度为200mM，pH值为8.8。
5. 如权利要求2或3所述的可视化鉴别口蹄疫病毒和蓝舌病病毒的二重荧光RT-LAMP检测试剂盒，其特征在于，所述酶溶液含15U 的Bst DNA 聚合酶和 20U 的AMV逆转录酶。
6.如权利要求2或3所述的可视化鉴别口蹄疫病毒和蓝舌病病毒的二重荧光RT-LAMP检测试剂盒的非疾病诊断和非治疗目的的使用方法，其特征在于，将反应体系中的各个组分混合均匀，置恒温仪或水浴锅，于65-68°C进行RT-LAMP反应90分钟。
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