[发明专利]一种检测血清总Ⅰ型胶原氨基端延长肽的试剂盒及使用方法

说明书

本发明提供了一种检测血清总Ⅰ型胶原氨基端延长肽的试剂盒，其检测灵敏度高、可靠性好。一种检测血清总Ⅰ型胶原氨基端延长肽的试剂盒，其特征在于，包括校准品、质控品、生物素标记的总Ⅰ型胶原氨基端延长肽抗体的溶液、辣根过氧化物酶标记的总Ⅰ型胶原氨基端延长肽抗体的溶液、链霉亲和素标记的纳米磁微粒悬浮液和底物；生物素标记的总Ⅰ型胶原氨基端延长肽抗体的溶液的浓度为1.5μg/ml；链霉亲和素标记的纳米磁微粒悬浮液的浓度为0.5mg/ml；辣根过氧化物酶标记的总Ⅰ型胶原氨基端延长肽抗体溶液的浓度为1.5μg/ml。

技术领域

本发明属于医疗器械生物类免疫体外诊断领域，具体涉及一种检测血清总Ⅰ型胶原氨基端延长肽的试剂盒及使用方法。

背景技术

骨质疏松症是一种静态疾病：发生骨折前的一些非特异性症状常常被忽视:如腰背痛。大多数病例是在骨折后被诊断的 ，相关的并发症大多为骨折，这一点极大地提高了医疗费用。早期诊断能够帮助减少医疗经费。越来越多的医院科室开设了骨质疏松检测，例如：内分泌科、骨科、妇产科、中医科等，并逐渐开始重视收治骨质疏松病人。目前我国的各级医院主要以骨密度为辅助诊断标准，尚未全面使用骨代谢标志物指标。根本原因是我国一直以来缺乏完善的五项生物学标志物诊断试剂，导致骨代谢五项标志物的免疫学诊断一直不能临床普遍开展。如果能做到早期准确诊断，骨质疏松疾病应该是一种可以治疗、控制、甚至治愈的慢性病。

I型胶原蛋白的单链分子量139KDa，由1460个氨基酸组成。其空间结构为三个肽链的螺旋区和两端的非螺旋区组成。pro-alpha1(I) 链对应基因COL1A1，pro-alpha 2(I) 链对应基因COL1A2。Ⅰ型胶原氨基端延长肽（PINP）是N端的异三聚体片段，分子量约100KDa。

P1NP反映的是I型胶原的沉积情况，因此是作为一项骨形成标志物。在I型胶原的形成过程中，P1NP被释放至细胞外间隙最终进入血液。P1NP为三聚体形式（由三聚体胶原转化而来），但很快会在热降解作用下成为单体形式。P1NP试剂检测的是血液中所有的P1NP形式。结构完整的P1NP抗原获取困难。

在国内，血清总Ⅰ型胶原氨基端延长肽（tP1NP）检测临床上主要以国外罗氏公司试剂应用为主，国外进口试剂价格非常昂贵，给患者带来很大的经济负担，不利于在基层普及。因此，有待开发一种血清总Ⅰ型胶原氨基端延长肽检测灵敏度高、可靠性好的试剂盒，以降低患者使用成本，并提高推广使用。

发明内容

针对上述问题，本发明提供了一种检测血清总Ⅰ型胶原氨基端延长肽的试剂盒，其检测灵敏度高、可靠性好；此外，本发明还提供了使用该试剂盒检测血清总Ⅰ型胶原氨基端延长肽的方法。

一种检测血清总Ⅰ型胶原氨基端延长肽的试剂盒，其特征在于，包括校准品、质控品、生物素标记的总Ⅰ型胶原氨基端延长肽抗体的溶液、辣根过氧化物酶标记的总Ⅰ型胶原氨基端延长肽抗体的溶液、链霉亲和素标记的纳米磁微粒悬浮液和底物；

所述校准品包括浓度为0 ng/mL、10 ng/mL、25 ng/mL、100 ng/mL、400 ng/mL、1200ng/mL的总Ⅰ型胶原氨基端延长肽抗原溶液；

所述质控品包括浓度为25 ng/mL、400 ng/mL的总Ⅰ型胶原氨基端延长肽抗原溶液；

所述生物素标记的总Ⅰ型胶原氨基端延长肽抗体的溶液的浓度为1.5 μg/ml；

所述链霉亲和素标记的纳米磁微粒悬浮液的浓度为0.5mg/ml；

所述辣根过氧化物酶标记的总Ⅰ型胶原氨基端延长肽抗体溶液的浓度为1.5 μg/ml；

所述底物溶液包括溶液A和溶液B，溶液A为含有0.4%鲁米诺，pH9.0的水溶液，溶液B为含有0.06%Na2B4O7 ，pH5.0的水溶液。