[发明专利]一种检测血清总Ⅰ型胶原氨基端延长肽的试剂盒及使用方法

权利要求书

1.一种检测血清总Ⅰ型胶原氨基端延长肽的试剂盒，其特征在于，包括校准品、质控品、生物素标记的总Ⅰ型胶原氨基端延长肽抗体的溶液、辣根过氧化物酶标记的总Ⅰ型胶原氨基端延长肽抗体的溶液、链霉亲和素标记的纳米磁微粒悬浮液和底物；

所述校准品包括浓度为0 ng/mL、10 ng/mL、25 ng/mL、100 ng/mL、400 ng/mL、1200ng/mL的总Ⅰ型胶原氨基端延长肽抗原溶液；

所述质控品包括浓度为25 ng/mL、400 ng/mL的总Ⅰ型胶原氨基端延长肽抗原溶液；

所述生物素标记的总Ⅰ型胶原氨基端延长肽抗体的溶液的浓度为1.5 μg/ml；

所述链霉亲和素标记的纳米磁微粒悬浮液的浓度为0.5mg/ml；

所述辣根过氧化物酶标记的总Ⅰ型胶原氨基端延长肽抗体溶液的浓度为1.5 μg/ml；

所述底物溶液包括溶液A和溶液B，溶液A为含有0.4%鲁米诺，pH9.0的水溶液，溶液B为含有0.06%Na2B4O7 ，pH5.0的水溶液。

2.根据权利要求1所述的一种检测血清总Ⅰ型胶原氨基端延长肽的试剂盒，其特征在于：所述校准品、所述质控品均由总Ⅰ型胶原氨基端延长肽抗原与0.1M、pH值为7.2的Tris-HCl缓冲液配制得到；总Ⅰ型胶原氨基端延长肽抗原购自众森源生物技术(江苏)有限公司，货号为8001。

3.根据权利要求1所述的一种检测血清总Ⅰ型胶原氨基端延长肽的试剂盒，其特征在于：所述生物素标记的总Ⅰ型胶原氨基端延长肽抗体的配制方法为：将浓度为1mg/ml总Ⅰ型胶原氨基端延长肽抗体按1:20体积比加入到浓度为10mg/ml的生物素溶液）中，然后将其加入到0.01M pH值为7.2的磷酸盐缓冲液中，4℃透析18小时以上，期间换液3-4次，第一次换液间隔2小时以上，其后间隔4小时，透析完成之后再用0.01M、pH值为7.2的磷酸盐缓冲液透析后调整浓度至1.5μg/ml；总Ⅰ型胶原氨基端延长肽抗体购自众森源生物技术(江苏)有限公司，货号为8010。

4.根据权利要求1所述的一种检测血清总Ⅰ型胶原氨基端延长肽的试剂盒，其特征在于：所述辣根过氧化物酶标记的总Ⅰ型胶原氨基端延长肽抗体的配制方法为：将浓度为1mg/ml总Ⅰ型胶原氨基端延长肽抗体按1:20体积比加入到浓度为5.0mg/mL的辣根过氧化物酶溶液中，混合后并纯化，得到辣根过氧化物酶标记的总Ⅰ型胶原氨基端延长肽抗体，所述纯化是用pH为8-9的碳酸氢盐缓冲液平衡并洗脱，再紫外检测和记录纯化图谱，再用0.05M、pH值为6.0的MES缓冲液对辣根过氧化物酶标记的总Ⅰ型胶原氨基端延长肽抗体稀释至1.5μg/m；总Ⅰ型胶原氨基端延长肽抗体购自众森源生物技术(江苏)有限公司，货号为8011。

5.根据权利要求1所述的一种检测血清总Ⅰ型胶原氨基端延长肽的试剂盒，其特征在于：所述链霉亲和素标记的纳米磁微粒悬浮液的制备过程为：先将链霉亲和素标记的纳米磁微粒用磁分离器沉淀；然后在去除磁场的情况下，沉淀用0.01M、pH值为7.3的磷酸盐缓冲液重悬，混匀磁分离；其次，加上磁场，使得链霉亲和素标记的纳米磁微粒沉出；再次，清洗沉淀；最后，清洗后链霉亲和素标记的纳米磁微粒分散于0.01M、pH值为7.3的磷酸盐缓冲液；所述链霉亲和素标记的纳米磁微粒购自GE公司，货号21152104010350。

6.根据权利要求1所述的一种检测血清总Ⅰ型胶原氨基端延长肽的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括洗液，所述洗液为含有1%吐温、0.1% Proclin300的Tris-HCl缓冲液，pH7.8。