[发明专利]提高莱鲍迪苷A1G含量的结晶法、其产品及用途

说明书

本文涉及提高莱鲍迪苷A1G含量的结晶法、其产品及用途。本文中采用多次结晶的方法(例如二次、三次等)，对于甜菊糖苷莱鲍迪苷A(RA)衍生产物RA1G进行了纯化，获得了口感改善的高纯度RA1G。并且，结晶液相还可循环利用到进一步生产中，节约了生产成本。本发明的方法操作简单，生产工艺绿色环保，成本低，周期短，转化效率高，所得产品口感好，于食品与饮料等行业具有重要的应用价值。

技术领域

本发明属于生物技术和食品化工技术领域。具体而言，本发明涉及一种用于提高莱鲍迪苷A酶改性产物中莱鲍迪苷A1G含量的结晶方法及其产品和用途。

背景技术

甜菊糖苷是一系列从菊科草本植物甜叶菊(Stevia rebaudiana Bertoni)的叶中提取出的糖苷类物质，其中天然产物中占主要含量的为甜菊苷(Stevioside，缩写为Stv)和莱鲍迪苷A(Rebaudioside A，缩写为RA，也称为甜菊双糖苷A)。

莱鲍迪苷A的分子结构如下所示，是一种含20个碳原子的四环二萜类糖苷物质，其由二萜核心在C19位上连接一个葡糖基和C13为上连接3个葡糖基而形成：

研究表明，莱鲍迪苷A的甜度是蔗糖的200-300倍，热量仅为蔗糖的1/300，对酸、碱、热都很稳定，长期储存不易变质，加入食品中经热处理也不会有褐变现象，且不容易造成龋齿。我国在《GB8270-2014食品安全国家标准》和《GB2760-2014食品安全国家标准》的国家标准中对其做作为食品添加剂的使用进行了详细说明。2009年，美国食品药品监督管理局FDA也认可莱鲍迪苷A为“GRAS(Generally Recognized as Safe，总体认为是安全的)”的级别。甜菊糖苷类物质作为蔗糖的天然替代品，不仅可以降低成本，同时也符合食品、饮料逐渐向低糖低热量化发展的要求，是一类非常理想的具有多种用途的绿色甜味剂。

然而，莱鲍迪苷A有严重的苦涩后味，影响其在食品中的应用。为了改善其口感，现有技术中利用生物酶改性的方法，以莱鲍迪苷A为受体底物，在其二萜核心C19和C13位上加入不同数量和不同键型的葡萄糖、半乳糖等，以获得口味改善的酶改性产物。莱鲍迪苷A的酶催化改性的产物通常为不同位点和不同数量的糖基化产物的混合物，这就造成了产物组分复杂，口感不均一等问题。并且，由于产物混合物中的组分具有相同的母核，分子结构和极性都非常相近，常规手段很难分离纯化。为提高有效产物的浓度，对生产工艺的创新和优化提出了更高的要求。

因此，进一步开发具有较高纯度和改善口感的甜菊糖苷衍生产品，并提供其生产工艺以提高有效产物的含量，成为甜菊糖苷工业化生产的发展趋势。

发明内容

本文正是提供了一种新型甜菊糖衍生物(即莱鲍迪苷A1G)的纯化方法以及纯化产物，以改善原料口感，以较低的成本和较短的生产周期产出优质的甜菊糖苷衍生物R1G。

在本发明的一些方面中，提供了一种纯化如下结构所示的化合物莱鲍迪苷A1G(RA1G)的方法，

所述方法包括：

(a)可选地，对包含RA1G的原料进行纯化前预处理；

(b)采用甲醇水溶液为溶剂，对经或未经预处理的包含RA1G的原料进行第一次结晶并进行固液分离；

(c)取前一次结晶所得固相，采用甲醇水溶液为溶剂溶解，并在适当条件下，进行第二次结晶得到纯化产物；

(d)可选地，对前次结晶得到的纯化产物重复结晶纯化一次或多次或采用其他纯化方式进行进一步纯化；

(e)可选地，将结晶纯化步骤中所余的液相循环利用到包含RA1G的原料的制备过程中。