[发明专利]用于检测无乳链球菌的RPA引物、探针及检测方法在审
| 申请号： | 201810696634.3 | 申请日： | 2018-06-29 |
| 公开（公告）号： | CN108531634A | 公开（公告）日： | 2018-09-14 |
| 发明（设计）人： | 兰全学;王远洋;杨平;马芳草;刘斌;陈嘉露;陈泽峰;刘灵燕;陈薇;杨国武 | 申请（专利权）人： | 深圳市计量质量检测研究院（国家高新技术计量站;国家数字电子产品质量监督检验中心） |
| 主分类号： | C12Q1/689 | 分类号： | C12Q1/689;C12Q1/6844;C12Q1/14;C12N15/11;C12R1/46 |
| 代理公司： | 深圳市科吉华烽知识产权事务所(普通合伙) 44248 | 代理人： | 胡玉 |
| 地址： | 518000 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 无乳链球菌 检测 探针 引物 上游引物 特异性强 温控设备 下游引物 引物序列 荧光检测 灵敏度 | ||
1.一种用于检测无乳链球菌的RPA引物，其特征在于，其引物序列如下
针对
上游引物SEQ ID No.1：5’-CACCGGTAAGAACTGTAGCAGCCCCTAGAGTG-3’
下游引物SEQ ID No.2：5’-CTTCAGTCGCTTGTAACTTACTGTCTGTAGC-3’。
2.一种如权利要求1所述的用于检测无乳链球菌RPA引物，其特征在于，采用上游引物、下游引物中的至少一种，或选自该引物碱基序列或其互补链序列中单条序列同源性为50%及以上的碱基序列。
3.如权利要求2所述的用于检测无乳链球菌的RPA引物，其特征在于，所述下游引物SeqID No.2在5’端进行biotin修饰。
4.一种用于检测无乳链球菌的RPA探针，其特征在于，其序列如下：
SIP基因的探针:
5’-AAGTAGAAACTGGTGCATCACCAGAGCATGTATCAGCTCCAGCAG-3’，
其长度为45-52bp，探针的5’端30bp 的位置处采用dSpacer 修饰，dSpacer分子两侧的胸腺嘧啶分别被荧光基团ROX和淬灭基团BHQ1取代，并且在探针的3’末端也需要通过阻塞基团C3Spacer修饰。
5.一种如权利要求4所述的用于检测无乳链球菌的RPA探针，其特征在于，采用探针序列或其互补链序列中单条序列同源性为50%及以上的碱基序列。
6.一种检测无乳链球菌的RPA方法，其特征在于，包括如下几个步骤：
（1）提取待测样品的DNA；
（2）采用权利要求1的序列组成合成RPA特异性引物、如权利要求4所述的序列组成合成RPA特异性探针、步骤1提取DNA以及反映buffer、醋酸镁配置成反应体系；
（3）在RPA反应管中进行扩增反应，同时利用荧光收集器收集荧光，判断待测基因组是否为无乳链球菌。
7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述步骤（3）中的RPA反应管中RPA反应体系以50μL计为：
。
8.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述RPA反应条件为：37℃-42℃，反应时间为15-20分钟。
9.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述RPA反应体系进一步包括阳性质控品和阴性质控品。
10.如权利要求1所述的引物或如权利要求4所述的RPA探针在检测无乳链球菌中的应用。
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