[发明专利]去除并测定湿地植物根际微生物群落对植物吸收水中磷影响的实验方法

权利要求书

1.一种去除并测定湿地植物根际微生物群落对植物吸收水中磷影响的实验方法，其特征在于：所述去除并测定湿地植物根际微生物群落对植物吸收水中磷影响的实验方法包括如下步骤：

(1)去除湿地植物根际微生物；

(2)植物培养液配制；

(3)去除根际微生物的植物培养对比实验。

2.根据权利要求1所述的去除并测定湿地植物根际微生物群落对植物吸收水中磷影响的实验方法，其特征在于：所述去除湿地植物根际微生物包括如下步骤：

(1)采集天然湿地植物，实验前先用自来水初步将整株植物冲洗干净，根部不留土壤；

(2)用蒸馏水浸湿的棉球擦拭植物根和茎，直至棉球上没有褐色土壤痕迹为止，接着将植物根部浸泡在75％的酒精中10～15分钟(与酒精接触总时间不超过20分钟，以免伤害植物，影响后续培养实验)，在无菌操作台中，将浸泡过的植物从酒精中取出，迅速用无菌水冲洗掉残余酒精，在无菌环境中，用棉球沾取75％的酒精并继续全面仔细擦拭植物的根须3遍，擦过后立刻用无菌水冲洗或擦拭掉残余酒精，即得到根际微生物被去除的植株；

(3)为验证根际微生物是否被去除干净，取250mL锥形瓶，加入蒸馏水100mL，于121℃下高压灭菌锅中灭菌20分钟，冷却到室温，得到灭菌后的装有无菌水的锥形瓶，再将进行上述操作后的去除根际微生物的植株，取一株植物在无菌条件下，用灭菌过的剪刀或小刀剪下其根须2g，放入装有100mL无菌水的灭菌锥形瓶中，用灭菌棉塞或封口膜封口，放置在恒温震荡器上震荡30分钟后取出，取其中1mL震荡提取液，在无菌条件下，均匀涂布在已制备好的灭菌过的牛肉膏蛋白胨固体培养基上，然后放置在恒温培养箱中30℃下培养48小时后观察，如果没有菌落生长，则说明根际微生物已去除干净。

3.根据权利要求1所述的去除并测定湿地植物根际微生物群落对植物吸收水中磷影响的实验方法，其特征在于：所述植物培养液配制包括如下步骤：

(1)植物培养液主要成分：磷药品纯度达到分析纯以上，用磷酸三钙(Ca₃(PO₄)₂)或磷酸二氢钾(KH₂PO₄)或卵磷脂，以磷计浓度，配制成磷含量在0～5mg/L的培养液；植物培养液原料水，采集水质达到或优于《地表水环境质量标准》GB3838-2002)III类标准的天然地表水；尿素和葡萄糖；

(2)先将含磷化合物药剂，如磷酸二氢钾于110℃干燥2h后在干燥器中放冷，并用分析天平称取0.0877g(对应磷质量20mg)，再称取0.214g尿素，2.0g葡萄糖，加蒸馏水溶解，再定容到1000mL容量瓶中，配成20mg/L的磷储备液；

(3)将“磷储备液(20mg/L)”用“植物培养液原料水”稀释成0～5mg/L的磷植物培养液。

4.根据权利要求1所述的去除并测定湿地植物根际微生物群落对植物吸收水中磷影响的实验方法，其特征在于：所述去除根际微生物的植物培养对比实验包括如下步骤：

(1)采集天然湿地植物，实验前先用自来水初步将整株植物冲洗干净，根部不留土壤，选取其中生长良好，长势相近的菖蒲数株，稍作清洗，修剪掉枯枝败叶，测实验前后测定植物直径和高度：用游标卡尺量取菖蒲的直径，测量高度，每株植物测量3次取平均值，实验前后测定植物体内总磷含量；

(2)将一部分植物做去除根际微生物处理，另一部分不去除根际微生物，做对比实验，取1000mL锥形瓶，加入上述“磷植物培养液”，将处理好的菖蒲插入其中，对去除了根际微生物的植物，用灭菌过的脱脂棉包裹植物堵住锥形瓶口(组1)，未去除根际微生物的植物放入锥形瓶，操作同上，但不用堵口(组2)，于洁净、通风、透光处培养10～15天，测量培养液中磷浓度，每个磷浓度做3个平行，比较组1和组2培养液中磷浓度，得到二者之差即为湿地植物根际微生物群落对植物吸收水中磷的影响。