[发明专利]一种利用无血清培养基生产PEDV灭活疫苗的方法

权利要求书

1.一种利用无血清培养基生产PEDV灭活疫苗的方法，所述方法包括如下步骤：

步骤（1），Vero细胞的复苏；

步骤（2），Vero细胞的传代扩增；

步骤（3），在Vero细胞上接种PEDV病毒毒株；

步骤（4），收获感染细胞培养上清液，病毒液进行澄清过滤；

步骤（5），灭活，即制备得到PEDV灭活疫苗；

其中步骤（2）中的传代扩增和步骤（3）中病毒的增殖过程均采用所述无血清培养基；

所述无血清培养基由基础培养基，牛血清白蛋白，皮质醇，胰岛素，转铁蛋白，谷胱甘肽，胰蛋白酶，牛磺酸和亚硒酸钠组成，其中牛磺酸和亚硒酸钠的重量份配比比例为2-3:1；

所述的无血清培养基中：

所述的基础培养基IMDM或者是RPMI-1640，或者是二者的混合物；

所述的牛血清白蛋白的含量为8-15mg/mL；

所述的皮质醇的含量为15-25μg/mL；

所述的胰岛素的含量为10-20μg/mL；

所述的转铁蛋白的含量为10-15μg/mL；

所述的谷胱甘肽的含量为2-3mM；

所述的胰蛋白酶的含量为3-5μg/mL；

所述的牛磺酸的含量为20-30μg/mL；

所述的亚硒酸钠的含量为10-12μg/mL。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的无血清培养基中：

所述的基础培养基IMDM或者是RPMI-1640，或者是二者的混合物；

所述的牛血清白蛋白的含量为10mg/mL；

所述的皮质醇的含量为20μg/mL；

所述的胰岛素的含量为20μg/mL；

所述的转铁蛋白的含量为15μg/mL；

所述的谷胱甘肽的含量为3mM；

所述的胰蛋白酶的含量为4μg/mL；

所述的牛磺酸的含量为20μg/mL；

所述的亚硒酸钠的含量为10μg/mL。

3.根据权利要求1-2任一项所述的方法，其特征在于：所述的无血清培养基的制作方法是：步骤一，按重量份称取基础培养基干粉、牛血清白蛋白，皮质醇，胰岛素，转铁蛋白，谷胱甘肽，胰蛋白酶，牛磺酸和亚硒酸钠；步骤二，将称取的以上物质混合后，加超纯水至1000mL，搅拌溶解，调节pH值至7.0-7.2，而后采用0.22μm滤膜过滤除菌，4℃保藏。