[发明专利]一种单细胞测序筛选成纤维细胞标记分子的方法在审
| 申请号： | 201810691766.7 | 申请日： | 2018-06-28 |
| 公开（公告）号： | CN109112192A | 公开（公告）日： | 2019-01-01 |
| 发明（设计）人： | 赵永祥;薛志刚;钟莉娉;阳诺;何坚 | 申请（专利权）人： | 广西医科大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6869 | 分类号： | C12Q1/6869 |
| 代理公司： | 北京科亿知识产权代理事务所(普通合伙) 11350 | 代理人： | 韦肖燕 |
| 地址： | 530001 广西壮*** | 国省代码： | 广西;45 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 成纤维细胞 标记分子 测序 构建 肿瘤 生物信息学分析 筛选 高通量测序 测序文库 产物纯化 逆转录 裂解 | ||
【权利要求书】：
1.一种单细胞测序筛选成纤维细胞标记分子的方法，其特征在于：包括以下步骤：
1）提取肿瘤成纤维细胞；
2）分离单细胞并进行裂解：分离单细胞，加入裂解缓冲液中进行裂解，得到细胞裂解液；
3）对样品的mRNA进行逆转录得到cDNA：使用美国ThermoFisher公司的SuperScript试剂盒构建逆转录体系，对上述步骤2）获得的细胞裂解液进行逆转录，得到cDNA；
4）以cDNA为模板进行PCR扩增，构建测序文库，进行测序：使用美国Illumina公司的NexteraXT试剂盒，对上述步骤3）得到的逆转录产物进行扩增和纯化，构建高通量测序文库；完成后将文库送交测序；
5）对测序结果进行生物信息学分析，寻找肿瘤成纤维细胞特异性的标记分子。
2.根据权利要求1所述单细胞测序筛选肿瘤成纤维细胞标记分子的方法，其特征在于：所述步骤1）中，将从肿瘤组织中提取的成纤维细胞进行单细胞测序，从mRNA水平上寻找肿瘤成纤维细胞特异性的标记分子。
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