[发明专利]一种水稻DNA的简易提取方法

说明书

本发明提供了一种水稻DNA的简易提取方法，包括：将剪碎的叶片在研磨仪上震荡研磨，加入氯仿颠倒混匀后离心至分相，取上清加入冰无水乙醇，离心至沉淀附于离心管底部，弃上清，用70％乙醇洗涤沉淀，自然干燥，用1/10×TE缓冲液溶解沉淀，保存备用。本发明方法提取的DNA具有产率高、质量好、成本低且较为安全等特点。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种水稻DNA的简易提取方法。

背景技术

水稻是世界上最主要的三大粮食作物之一，有着丰富和深入的基因组研究基础，其中DNA的制备是深入进行分子生物学研究的基础。基于PCR分子标记技术已经广泛应用于基因定位、基因克隆、转基因植株检测及分子标记辅助育种等方面，这些研究都需要进行大量DNA提取工作。然而，DNA提取是一项耗费人力、物力的繁琐工作。因此，建立适合PCR分析的简便、高效、低成本且较为相安全的DNA提取方法是非常必要的。

前人已就植物基因组DNA的提取总结了一系列的方法，如SDS法和CTAB法，虽然这些方法抽提的DNA质量较好，但过程费力且繁琐，需要使用氯仿、异戊醇等有毒化学试剂，难以适用于大量植物叶片基因组DNA提取的需要。相应地，一些生物公司也开了一些基因组DNA提取试剂盒，但试剂盒提取DNA成本较高，也不适用于大量样品DNA的提取。

发明内容

为了解决上述问题，实现高通量提取水稻DNA，满足各种PCR分子标记技术的要求，本发明提供了一种简单、快速的提取植物DNA的方法。

本发明具体通过以下技术方案实现：

一种水稻DNA的简易提取方法，包括以下步骤：

1)从水稻幼苗上剪取叶片并剪成碎片，放入离心管中；

2)加入小钢珠和DNA提取液，在Tissuelyser-192组织研磨仪上震荡研磨；

3)加入氯仿颠倒混匀，静置后，离心至清晰分相，吸取上清液转入新的离心管中，弃枪头；

4)加入在-20℃冰箱预冷的无水乙醇，颠倒混匀；

5)离心至沉淀附于离心管底部，弃上清液，用乙醇洗涤沉淀，将离心管倒置，自然干燥；

6)加入1/10×TE缓冲液溶解沉淀，样品置于-20℃冰箱中保存备用。

进一步，所述的震荡研磨具体为：在25Hz下震荡研磨60s。

进一步，所述的步骤(4)中冰箱的温度条件为-20℃。

进一步，所述的离心条件均为11000rpm。

进一步，所述的洗涤沉淀用的乙醇浓度为70％。

进一步，所述的DNA提取液为：10mL浓度为1M的Tris-HCl(pH8.0)、10mL浓度为0.5M的EDTA(pH8.0)、10mL浓度为5M的NaCl，最后利用dd H₂O定容至100mL，配置新鲜溶液待用。

本发明的有益效果为：

本发明提供了一种操作简单的水稻DNA提取方法，该方法在提取过程中使用的试剂相比现有技术少，不仅降低了成本，还减少SDS和异戊醇等有毒有害试剂使用，提高实验人员的安全性，且提取得到的DNA具有很长的保存时间，不易降解，同时提高了水稻DNA的提取效率。

附图说明

图1是SSR标记RM303检测协青早B(XB)和196个协青早B与东乡野生稻BC₂F₅株系基因型结果；