[发明专利]一种皱叶山姜的组织培养快繁方法

说明书

本发明公开了一种皱叶山姜的组织培养快繁方法。该方法包括外植体消毒、不定芽诱导、不定芽增殖、生根壮苗和炼苗移栽步骤。本发明只需简单的植物组织培养设备即可进行，在80～120d内完成从外植体块茎上的芽点到完整植株的一个周期，大大加快了皱叶山姜的繁殖速度。本方法培养皱叶山姜生产周期短、增殖倍数高、成活率高，能获得足量试管植株，利于大规模市场推广。

技术领域

本发明属于植物组织培养技术领域，具体涉及一种皱叶山姜的组织培养快繁方法。

背景技术

皱叶山姜(Alpinia rugosa S.J.Chen&Z.Y.Chen)是姜科山姜属新种，仅产海南保亭吊罗山。自1990年引种到华南植物园后，国内的西双版纳植物园和国外夏威夷自华南植物园引种。目前夏威夷已将皱叶山姜繁殖应用。该植物以其叶皱缩，具有极高的园艺观赏性，是姜科新型园艺观赏植物。叶片长圆，叶面无毛，背面密被短柔毛，极具皱纹，基部深心形重叠，稍偏斜。总状花序直立，密花，有9-20朵花，整个花序在果期稍长，背密黄色短柔毛；苞片褐色，花萼粉红色，管状；因其株型整齐、叶片奇特且易于栽培管理，可应用于各类公共绿地、庭院及道路两旁绿地，也可作为室内观叶和林下地被植物。

皱叶山姜繁殖主要采用切分根状茎繁殖，因物种的稀缺性，没有过多的植株供切分繁殖。且切分繁殖增殖率较低，长期分株繁殖容易感染病毒，不利于品种优良遗传特性的稳定性。组织培养繁殖成活率高、繁殖增长率高、生长周期短，可在短期内进行大规模繁殖；然而，尚未有适合皱叶山姜组织培养快繁的相关方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种皱叶山姜的组织培养快繁方法，以克服现有技术中存在的不足，该方法培养皱叶山姜生产周期短、增殖倍数高、成活率高，能获得足量试管植株；并且提高皱叶山姜种苗稳定性，保持母株的优良特性。

本发明的皱叶山姜的组织培养快繁方法，包括以下步骤：

a.外植体消毒：挑选有新芽的皱叶山姜地下茎，除去须根、茎尖、外层包裹的叶片，清理消毒，切分含有单个芽点的块茎作为外植体，对外植体进行消毒；

b.不定芽诱导：将外植体接种到不定芽诱导培养基中，诱导培养不定芽；所述的不定芽诱导培养基：每升含有6‐苄氨基腺嘌呤2.0～3.5mg、奈乙酸0.2～0.3mg、蔗糖20～30g、琼脂5.0～6.0g，余量为MS培养基，pH值为5.6～5.8；

c.不定芽增殖：切取不定芽，除去叶片和茎，留芽基部，将其接种到不定芽增殖培养基中，培养形成丛生芽；所述的不定芽增殖培养基：每升含有6‐苄氨基腺嘌呤1.5～3.0mg、奈乙酸0.1～0.3mg、蔗糖20～30g、琼脂5～6g，余量为MS培养基，pH值为5.6～5.8；

d.生根壮苗：切取单个丛生芽，将其接种到生根壮苗培养基中，培养形成生根苗；所述的生根壮苗培养基：每升含有奈乙酸0.3～0.8mg、蔗糖20～30g、琼脂5～6g，余量为MS培养基，pH值为5.6～5.8；

e.炼苗移栽：将生根苗取出，洗净根部培养基，经消毒后将生根苗移栽至栽培基质中，进行培养管理，获得皱叶山姜种苗。

优选，所述的步骤a的清理消毒是用体积分数75％乙醇水溶液冲洗干净；所述的步骤a中对外植体进行消毒是将外植体用体积分数75％乙醇水溶液浸泡20～30s，无菌水清洗1次；再用质量分数0.08％～0.12％升汞浸泡8～10min，无菌水冲洗4～6次。

优选，所述的步骤b、c、d中的培养条件为：温度27±2℃，光照强度1800～2300lx，光照时间10～14h/d。

更优选的，所述的步骤b、c、d中的培养条件为：温度27±2℃，光照强度2000lx，光照时间12h/d。

优选，所述的步骤e的消毒是将生根苗使用质量分数0.1％～0.3％百菌清溶液浸泡30～40min。