[发明专利]同时检测粮谷中21种真菌毒素的液相色谱-串联质谱方法

说明书

本发明公开了一种同时检测粮谷中21种真菌毒素的液相色谱‑串联质谱方法，包括下列步骤：(1)样品前处理；(2)净化；(3)LC‑MS/MS检测。本发明的方法操作简便、定性定量准确，可作为检测粮谷中多种真菌毒素的可靠方法。

技术领域

本发明涉及一种同时检测粮谷中21种真菌毒素的液相色谱-串联质谱方法，属于仪器检测技术领域。

背景技术

真菌毒素(mycotoxin)是一类由真菌产生的毒性二次代谢产物。广泛污染农作物、食品及饲料等植物性产品。目前已知的有300多种，其中有相当部分具有较强的致癌和致畸性，按其主要产毒菌种可分为曲霉菌毒素(如黄曲霉毒素、赭曲霉素等)，青霉菌毒素(如展青霉素、桔青霉素等)，镰刀菌毒素(如赭曲霉毒素A、玉米赤霉烯酮等)及其它类(如孢子素等)几大类。真菌毒素在粮食中的污染不可避免，某些食物中毒、慢性病与癌症的发生都与真菌毒素有关。在温暖干燥的气候环境下，黄曲霉毒素经常在玉米、花生中产生；在低温高湿的环境下，易产生呕吐毒素和玉米赤霉烯酮；温暖潮湿的环境容易产生伏马毒素；温度适宜的潮湿环境中T-2毒素容易产生。

高效实用的真菌毒素检测方法是保障粮食安全的重要措施，对保障粮食安全和保护国民健康有重要意义。真菌毒素检测方法主要有薄层色谱法(TLC)、酶联免疫法(ELISA)液相色谱法(LC)、气相色谱法(GC)、气相色谱-质谱联用法(GC-MS)以及液相色谱-质谱联用法(LC-MS)等。TLC属于半定量技术，设备简单，容易操作，且成本较低，可实现对真菌毒素的快速测定。但该方法灵敏度较低，重复性较差，真菌毒素检测时，并且可能对测定产生的干扰。ELISA适合单一真菌毒素和一类真菌毒素的筛查，由于存在抗体之间的交叉反应和假阳性或者假阴性反应，无法用来进行多种真菌毒素的同时检测以及最终的确证。LC方法是目前进行真菌毒素检测的主流方法，多用于一种或者同类真菌毒素检测方面。GC以及GC- MS方法通常被用来检测单端孢霉烯族类真菌毒素。LC-MS目前也开始逐步应用于真菌毒素的检测，尤其在多种真菌毒素的同时检测方面，LC-MS的方法的发展更为迅速。目前已经有QuEChERS方法检测植物油中15种真菌毒素的报道。检验检疫行业标准《SN/T 3136-2012出口花生、谷类及其制品中黄曲霉毒素、赭曲霉毒素、伏马毒素B1、脱氧雪腐镰刀菌烯醇、T-2毒素、HT-2毒素的测定》采用也液相色谱-串联质谱技术，实现了9种毒素的同时检测。

液相色谱-串联质谱联用技术在进行多中真菌毒素检测方面有着选择性好、灵敏度高、可以准确定性及定量等诸多优点。QuEChERS(Quick,Easy,Cheap,Effective,Rugged,Safe)技术操作简便，是近年来广泛应用的食品安全检测前处理技术。QuEChERS方法步骤可以简单归结为(1)样品粉碎；(2)单一溶剂乙腈提取；(3)加盐除水；(4)加入吸附剂除杂；(5)上机检测。QuEChERS技术除水用盐通常为ΜgSO₄或者Na₂SO₄；吸附剂的种类繁多，也是各试剂耗材公司QuEChERS产品的核心材料。目前市场上针对农药残留的QuEChERS产品种类非常多，农药残留的QuEChERS技术已经相当成熟，但是专门针对真菌毒素检测的QuEChERS 技术还不够成熟，选择适合真菌毒素净化的吸附剂是发展真菌毒素QuEChERS技术的关键。

发明内容

本发明提供一种前处理简单，检测灵敏的21种真菌毒素的检测方法,采用QuEChERS技术对样品进行前处理，液相色谱-串联质谱进行检测。