[发明专利]一种VEGF-A单克隆抗体及试剂盒

说明书

本发明公开了一种VEGF‑A单克隆抗体，其重链的氨基酸序列如VH:NP_001273973所示，其轻链的氨基酸序列如VL:AEP60973所示。所述VEGF‑A单克隆抗体具有较高的亲和力，特异性强，在体外具有良好的生物学活性。将本发明VEGF‑A单抗与VEGF‑A多抗建立的VEGF‑A蛋白检测试剂盒可作为VEGF/VEGFR通路肿瘤靶向药物的疗效评估工具。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种VEGF‐A单克隆抗体及VEGF‐A蛋白检测试剂盒。

背景技术

血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)是一种具有高度生物活性的一种二聚体阳离子糖蛋白。VEGF家族包括VEGF-A、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D、VEGF-E、VEGF－F和胎盘生长因子(Placental growth factor，PlGF)。人类VEGF-A基因定位于6p21.3，由8个外显子和7个内含子构成，全长14Kb。通过基因转录的mRNA不同剪接方式(Alternative splicing)，编码出4种主要异构体，它们为VEGF121，VEGF165，VEGF189和VEGF206，分别由121、165、189和206个氨基酸组成。VEGF121、VEGF145、VEGF165三种单体是分泌性蛋白质，可以从细胞浆中分泌到细胞外。VEGF145和VEGF165可以和所有内皮细胞的KDR/flk-1受体结合。VEGF165是VEGF家族最主要的异构体，也是生理活性最强的VEGF异构体，研究最为广泛，相应的报导也最多。

VEGF是主要介导血管生成(Angiogenesis)和血管发生(Vasculogenesis)的异构体，它是一种强大的特异的内皮细胞有丝分裂素，介导内皮细胞的增殖、出芽、迁移和管腔形成。1994年，Kondo Nishida等首次证实癌症和VEGF关系，根据Folkman假设实体瘤如果没有新的血管生成，由于受氧和其他营养成分供应的限制，其大小不会超过1-3mm³。血管内皮生长因子(VEGF)是促进肿瘤血管新生的关键性的蛋白因子。此外，越来越多的临床实验也表明，血管内皮细胞功能障碍是实体肿瘤形成的一个重要特点。2004年2月26日，美国罗氏公司生产的通过抑制VEGF-A作用机制的肿瘤治疗药物阿瓦斯汀获得FDA的批准。

靶向治疗药物贝伐单抗(Bevacizumab)是VEGF的人源化单抗，能与VEGF‐A各亚型及活性降解产物结合。人源化的贝伐单抗后来被Genentech公司商品化，商品名为Avastin。鉴于贝伐单抗在治疗转移性结直肠癌临床实验中的显著疗效，于2004年被美国食品与药物管理局(FDA)批准上市，用于一线治疗转移性结直肠癌，成为世界上首个获准上市的VEGF抑制剂，目前，FDA已批准贝伐单抗用于转移性结直肠癌、转移性乳腺癌、晚期非小细胞肺癌、转移性肾细胞癌的一线治疗。除此之外，贝伐单抗在肝癌、胃癌、食管癌等其他恶性肿瘤的应用也取得令人鼓舞的结果。2013年，美国Roche/Genentech公司正在进行VEGF‐A检测试剂盒的临床试验，其美国FDA临床试验批准号为NCT01663727。近年来研究表明，肿瘤患者血清中VEGF浓度与肿瘤疾病进展及治疗效果评价和疾病转归等方面有重要关系，在疾病的诊断及预测疾病治疗等方面存在很大的应用价值。

近十年来标记免疫分析技术的研究和应用发展迅速，已广泛应用于生物医学基础理论研究及临床疾病诊断各领域。用于检测血清学指标的方法主要包括放射性同位素免疫分析、酶联免疫吸附法、和化学发光免疫分析。这些方法既可以作为初筛试验也可以作为确认试验，其中化学发光法具有检测线性范围宽、检测仪器简单、操作方便等优点。

现有技术中针对VEGF/VEGFR通路靶向药物监测及疗效评估的产品目前国内尚属空白，同类产品其特异性和亲和力等方面还存在进一步的提升可能，基于此，我们开发了VEGF‐A测定试剂盒(化学发光法)及其制备方法。

发明内容