[发明专利]一种人肌母细胞外泌体的制备方法、产品及其应用

权利要求书

1.一种人肌母细胞外泌体的制备方法，其特征在于，该方法采用人肌母细胞作为外泌体的来源，将人肌母细胞分化培养的上清液通过递增离心的方式执行3次以上的多步离心分离操作，直至获得所需的外泌体产品。

2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，对于所述多步离心分离操作而言，其优选采用以下过程来实现：

S10、在0℃～4℃的温度下，将人肌母细胞分化培养的上清液在300g～3000g的离心力条件下离心10min～30min，去除沉淀并收集获得第一上清液A；

S20、在保持恒温的情况下，将该第一上清液A在10000g～12000g的离心力条件下继续离心60min～200min，去除沉淀并收集获得第二上清液B；

S30、在保持恒温的情况下，将该第二上清液B在100000g～120000g的离心力条件下继续离心120min以上，然后收集沉淀且将其作为最终制备的人肌母细胞外泌体产品。

3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，对于所述多步离心分离操作而言，其进一步优选采用以下过程来实现：

S101、在0℃～4℃的温度下，将人肌母细胞分化培养的上清液首先在300g～500g的第一离心力下离心5min～30min，去除沉淀并收集获得上清液A1；

S102、接着将该上清液A1在2000g～3000g的第二离心力下离心10min～40min，去除沉淀并收集获得所述第一上清液A；

S201、在保持恒温的情况下，将该上清液A在10000g～12000g的第三离心力条件下继续离心60min～100min，去除沉淀并收集获得上清液B1；

S202、接着在保持温度和第三离心力条件不变的情况下，对该上清液B1继续离心60min～100min，去除沉淀并收集获得所述第二上清液B；

S301、在保持恒温的情况下，首先将该第二上清液B采用孔径为0.22μm以下的无菌滤膜执行过滤；

S302、接着在保持恒温的条件下，将执行过滤后的所述第二上清液B继续在100000g～120000g的第四离心力条件下离心60min～120min，弃上清液，收集沉淀；

S303、向步骤S302所述沉淀加入PBS重混后，接着在保持温度和第四离心力条件不变的情况下，离心60min～120min，弃上清液，最后收集沉淀且将其作为最终制备的人肌母细胞外泌体产品。

4.一种护肤产品，其特征在于，该护肤产品的主要组分为人肌母细胞外泌体，所述人肌母细胞外泌体通过对皮肤细胞促增值和抑凋亡，用于皮肤细胞的修复和/或更新。

5.一种药品，其特征在于，该药品的主要组分为人肌母细胞外泌体，所述人肌母细胞外泌体用于优选烫伤创面之类的皮肤粘膜创面的抗菌消炎、促进创面愈合和/或疤痕修复。

6.如权利要求5所述的药品，其特征在于，所述人肌母细胞外泌体通过以下机理实现皮肤粘膜创面愈合和/或疤痕修复愈合：促进创面组织完成表皮再生，促进新生血管和细胞的再生，优化皮肤组织胶原的产生，从而而减少瘢痕的形成。