[发明专利]一步纯化固定化ɑ-氨基酸脂酰基转移酶的方法有效
| 申请号： | 201810672940.3 | 申请日： | 2018-06-26 |
| 公开（公告）号： | CN108728424B | 公开（公告）日： | 2021-09-14 |
| 发明（设计）人： | 李晨辉;刘超;王红权;李燕飞;康丽娟;马福民;姜召红;梁云科;李晓微 | 申请（专利权）人： | 河北善泉生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/10 | 分类号： | C12N9/10;C12N15/70;C12N11/16 |
| 代理公司： | 石家庄国为知识产权事务所 13120 | 代理人： | 柳萌 |
| 地址： | 050035 河北省石家庄市高*** | 国省代码： | 河北;13 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一步 纯化 固定 氨基酸 脂酰基 转移酶 方法 | ||
1.一种一步纯化固定化ɑ-氨基酸脂酰基转移酶的方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）将ɑ-氨基酸酯酰基转移酶基因与醛基化标签基因融合；在所述ɑ-氨基酸酯酰基转移酶基因的起始密码子前或终止密码子前加编码包含SEQIDNO:1的氨基酸序列的核苷酸序列；
（2）将步骤（1）融合后的基因和甲酰甘氨酸合成酶基因分别连接到原核表达载体上；
（3）将构建好的载体转入大肠杆菌，对两种酶进行同步诱导表达；所述同步诱导表达的方法为：将转入了构建载体的大肠杆菌在含有氨苄霉素和卡那霉素的液体LB培养基中培养至OD600=0.6-0.8时，加入IPTG对两种酶进行诱导；
（4）离心收集诱导完的菌体，破碎后离心收集上清，与氨基载体混合进行固定化；
所述ɑ-氨基酸酯酰基转移酶基因来源于鞘氨醇杆菌属，所述甲酰甘氨酸合成酶基因来源于肺炎链球菌属。
2.如权利要求1所述的一步纯化固定化ɑ-氨基酸脂酰基转移酶的方法，其特征在于：步骤（1）融合后的基因连接到pET30a载体获得SEAT-30a载体，甲酰甘氨酸合成酶基因利用Gateway系统，先连接到Topo载体，再重组至PDEST17载体上，获得FGE-pdest17载体。
3.如权利要求1所述的一步纯化固定化ɑ-氨基酸脂酰基转移酶的方法，其特征在于：IPTG的浓度为0.5~1mM，于25~30℃诱导2~12h。
4.如权利要求1所述的一步纯化固定化ɑ-氨基酸脂酰基转移酶的方法，其特征在于：步骤（4）中所述上清和氨基载体的质量比为1:0.5~20，反应温度8~30℃，pH6.5~8.0，反应时间2~24h。
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