[发明专利]一种用于检测液相蛋白质交互作用的蛋白质芯片及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种用于检测液相蛋白质交互作用的蛋白质芯片及其制备方法和应用，其中所述蛋白质芯片是在固相载体的表面点阵固定有探针；所述固相载体为氨基十六烷硫醇和活化槐糖脂化学修饰的金箔芯片；所述探针包括受体sCD25蛋白、配体IL‑2蛋白、sCD25抗体或IL‑2抗体。本发明蛋白质芯片具有高特异性和敏感性，其可视检测限与ELISA法测得抗原的最低检测限近乎相同，且其可以实现高通量联合检测，本发明旨在研发一种新方法用于液相中两种蛋白质交互作用的检测。

技术领域

本发明涉及一种用于检测液相蛋白质交互作用的蛋白质芯片及其制备方法和应用，属于生物技术领域。

背景技术

蛋白质相互作用已经在两种或更多种表征一种细胞或不同细胞的蛋白质之间被广泛认可。蛋白质之间的相互作用是信号转导的基本特征，并且对细胞水平上的发育和生理功能至关重要。近几十年来，大量蛋白质分析系统已被开发用于各种应用，包括免疫沉淀(IP)，免疫共沉淀(CO-IP)和酶联免疫吸附测定(ELISA)。这些工具中的每一种都具有明显的优势和局限性，但很少用于解决研究液相蛋白质相互作用的生物学或临床问题。

以IL-2和sCD25为例，酶联免疫吸附测定法(ELISA)和化学发光免疫测定法(CLIA)用于实验室血清sCD25的检测，而与ELISA相似的细胞计数珠阵列系统(CBA)人类Th1/Th2细胞因子试剂盒用于检测血清IL-2。CLIA作为一种常规的临床方法，对于sCD25检测具有参考价值，但是在样本测试批次中经常会有错误发生。更重要的是，这些技术不能同时在一个实验中对多个生物分子进行高通量并行比较分析，而具有自组装单分子层的生物芯片可以提供高通量筛选平台来检测来自血清的任何蛋白质之间的交互作用。

发明内容

本发明旨在提供一种用于检测液相蛋白质交互作用的蛋白质芯片及其制备方法和应用，以用于血清中受体sCD25和配体IL-2蛋白单体以及sCD25-IL-2复合体的检测。

本发明蛋白质芯片具有高特异性和敏感性，其可视检测限与ELISA法测得抗原的最低检测限近乎相同，且其可以实现高通量联合检测。

本发明用于检测液相蛋白质交互作用的蛋白质芯片，是在固相载体的表面点阵固定有探针；所述固相载体为氨基十六烷硫醇和活化槐糖脂化学修饰的金箔芯片。

槐糖脂酸化后的羧基用EDC和NHS活化后与氨基十六烷硫醇进行连接。

所述探针包括受体sCD25蛋白、配体IL-2蛋白、sCD25抗体或IL-2抗体。

本发明用于检测液相蛋白质交互作用的蛋白质芯片的制备方法，包括如下步骤：

步骤1：固相载体的制备

将1.45mg的氨基十六烷硫醇溶于6ml无水乙醇中获得修饰液1；将NHS和EDC溶于无菌水中作为修饰液2，在所述修饰液2中EDC浓度为150mM，NHS的浓度为50mM；50ug/ml的槐糖脂溶液作为修饰液3；

对金箔芯片进行清洗后，浸入所述修饰液1中，黑暗条件下室温摇荡孵育8-12h，氨基十六烷硫醇通过Au-S键组装到金箔芯片上，取出后用无水乙醇溶液清洗、氮气吹干；然后将所述修饰液2倒入修饰液3中，室温下反应1小时后点样于所得芯片上并于室温下孵育3小时，取出后用PBST溶液清洗、氮气吹干，获得固相载体；槐糖脂末端含有六个游离的羟基，可以增加其敏感性。

对金箔芯片进行清洗的过程如下：

将金箔芯片浸入丙酮中浸泡1小时，然后置于H₂O、氨水(25wt％)及H₂O₂溶液(30wt％)按体积比5：1：1混合构成的TL1清洗液中，82℃下水浴6分钟，清洗2次，取出后依次用超纯水和无水乙醇清洗，最后用氮气吹干。

所述修饰液2和修饰液3的体积比为1:2。