[发明专利]假体无菌性松动骨溶解半定量检测方法

说明书

本发明公开了一种假体无菌性松动骨溶解半定量检测方法，包括如下步骤：S1.取关节置换术患者假体安装位置的人工界膜组织处细胞，设置成对照组和实验组，均采用条件培养基进行培养，对照组在培养6～15d后，滴加酶，观察TRAP阳性多核细胞的变化并计数。本发明获取多个对假体无菌性松动有重要影响作用的指标，能早期诊断人工关节术后假体无菌性松动，对患者的创伤小，操作方便快捷，结果分析简单，良好的临床推广应用价值，对于指导临床治疗具有重要意义。

技术领域

本发明涉及人工关节置换术技术领域，更为具体地，涉及一种假体无菌性松动骨溶解半 定量检测方法。

背景技术

关节置换术采用金属、高分子聚乙烯、陶瓷等材料，根据人体关节的形态构造等制成人 工关节假体，并通过外科技术植入人体内代替患病关节。人工关节置换术是治疗骨关节疾病 的有效方法，是关节终末期疾病和老年股骨颈骨折的重要治疗手段。但是，人工关节材料、 手术方式、患者个体因素等均会影响人工关节的使用寿命。导致人工关节使用寿命较短的原 因有很多，归结起来主要有机械因素和生物因素。其中，生物学因素主要是人工关节磨损产 物(金属颗粒、金属离子等)会刺激炎性细胞分泌溶骨性因子如TNF-α、IL-6等，溶骨性因 子刺激骨细胞产生骨溶解，导致假体无菌性松动。目前一般在10～15年之间，就不得不进行 人工翻修。

关节置换术是世界上最成功的矫形外科手术之一，旨在提升患者的生活质量。随着社会 发展和人口老龄化进程加速，越来越多的患者选择关节置换术。假体无菌性松动是该手术主 要并发症，也是造成致残率高和花费昂贵的真正原因。因此，植入物无菌性松动属于医学领 域研究的热点和难点问题。

假体的无菌性松动，受到多因素影响。假体周围骨溶解导致的无菌性松动是人工关节置 换术后最常见的失败原因之一，目前对人工关节无菌性松动的具体发生机制尚不完全清楚， 可能是由多种因素，如磨损颗粒、金属离子、微动、应力遮挡、高液体压力等因素引起，磨 损产物诱导的假体周围骨溶解被认为是造成假体无菌性松动的主要原因。

假体无菌性松动的早期诊断有利于早期治疗，现有的检测方法依赖于影像学检测手段进 行早期诊断，例如X射线、CT扫描等。X射线检查是评价假体周围骨溶解和假体松动的重 要方法，但对于无明显骨溶解征象的假体松动一般难以做出诊断。假体无菌性松动目前仅依 靠影像学检查及出现了临床症状才进行诊断和严重程度评估，敏感度不够高，准确度低，不 能满足临床诊断需要。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种假体无菌性松动骨溶解半定量检测方 法，敏感度高，对早期诊断无菌性假体松动具有重要临床价值，能半定量检测骨溶解情况， 对患者的创伤小，操作方便快捷，结果分析简单，良好的临床推广应用价值，对于指导临床 治疗具有重要意义。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：一种假体无菌性松动骨溶解半定量检测方 法，包括：

S1、取关节置换术患者假体安装位置的人工界膜组织处细胞，设置成对照组和实验组， 均采用条件培养基进行培养，对照组在培养6～15d后，滴加酶，观察TRAP阳性多核细胞的 变化并计数；

S2、将步骤S1中在条件培养基中培养后的实验组分为实验I组和实验Ⅱ组，将实验I组 在含有CoCl₂溶液及CrCl₃溶液的混合液培养基中继续培养24～30h；实验Ⅱ组在原条件培养 基中培养24～30h后，将原条件培养基更换为不含金属离子的条件培养基继续培养48～60h， 分别收集实验I组、实验Ⅱ组的细胞及上清夜；

S3、分别检测步骤S2得到的上清液中的RANK蛋白、OPG蛋白的分泌量，计算实验I组、实验Ⅱ组中的RANK/OPG的比值；

S4、采集步骤S1中关节置换术患者的外周血单核细胞，检测患者外周血单核细胞中的 CD14⁺CD16⁺单核细胞比例；