[发明专利]一种检测微管蛋白抑制剂及相关杂质的高效液相色谱法

说明书

本发明公开了一种检测微管蛋白抑制剂(3Z,6Z)‑3‑((E)‑3‑(5‑叔丁基)‑1H‑咪唑基‑4‑基)亚甲基)‑6‑((E)‑3‑(3‑氟苯基)‑2‑丙烯亚基)哌嗪‑2,5‑二酮的高效液相色谱法。本发明方法可快速准确的检测出微管蛋白抑制剂(3Z,6Z)‑3‑((E)‑3‑(5‑叔丁基)‑1H‑咪唑基‑4‑基)亚甲基)‑6‑((E)‑3‑(3‑氟苯基)‑2‑丙烯亚基)哌嗪‑2,5‑二酮及其光降解产物等杂质，操作简单，重现性好，灵敏度高，可较好地控制微管蛋白抑制剂产品质量，为合成和制剂工艺优化提供了保证。

技术领域

本发明属于化学分析领域，具体涉及用高效液相色谱检测化合物及其在制备和储存过程中产生的杂质的方法。

背景技术

(3Z,6Z)-3-((5-叔丁基)-1H-咪唑基-4-基)亚甲基)-6-((E)-3-(3-氟苯基)-2-丙烯亚基)哌嗪-2,5-二酮是一种基于被取代的杂环骨架的微管蛋白抑制剂，分子式为C₂₁H₂₁FN₄O₂，具有式(I)所示的结构，下文将用代号HW130表示该化合物：

在合成和储藏该化合物的过程中，其分子结构中第3位和第6位的双键容易产生顺式异构体，此外还可能产生其它各种中间体、副产物和降解产物。检测该化合物及相关杂质对HW130制备过程及最终产品的质量控制十分重要，而采用一般的分析方法难于分离HW130与它的光学异构体。

发明内容

本发明的目的是提供一种检测HW130的高效液相色谱检测方法，包括以下步骤：

(1)制备供试品溶液和对照品溶液

取供试品与体积比为80∶20的乙腈-水溶液混合制成浓度为0.1～0.45mg/ml的溶液，作为供试品溶液；所述的供试品为含所述微管蛋白抑制剂的制品；

(2)取所述的微管蛋白抑制剂与体积比为80∶20的乙腈-水溶液混合制成浓度为0.001～0.0045mg/ml的溶液对照品溶液；

(3)采用高效液相色谱检测供试品和对照品

检测条件为：

色谱柱Zorbax Eclipse XDB-C18柱，

柱温25～45℃，

检测波长375±2nm，

流动相：以体积比为90∶10的磷酸盐缓冲液-乙腈为流动相A，以乙腈为流动相B，梯度洗脱，所述的磷酸盐缓冲液的浓度为0.01～0.05mol/L，pH值为4.5～8.5；

流速为0.8～1.3ml/min。

优选地，所述的供试品为含所述微管蛋白抑制剂的原料、粗品或者注射剂。

优选地，所述的供试品包含杂质A～F中的一种或者多种：

A为HW130的光学异构体，化学名称为(3Z,6E)-3-((5-叔丁基)-1H-咪唑基-4-基)亚甲基)-6-((Z)-3-(3-氟苯基)-2-丙烯亚基)哌嗪-2,5-二酮，具有式(II)所示的结构：

B为合成HW130的副产物，化学名称为(3Z,6Z)-3-((5-叔丁基)-1H-咪唑基-4-基)亚甲基)-6-((E)-3-(4-氟苯基)-2-丙烯亚基)哌嗪-2,5-二酮，具有式(III)所示的结构：

C为合成HW130的原料之一，化学名称为1,4-二乙酰基哌嗪-2,5-二酮，具有式(IV)所示的结构：