[发明专利]一种检测微管蛋白抑制剂及相关杂质的高效液相色谱法

权利要求书

1.一种微管蛋白抑制剂的高效液相色谱检测方法，所述的微管蛋白抑制剂为(3Z,6Z)-3-((5-叔丁基)-1H-咪唑基-4-基)亚甲基)-6-((E)-3-(3-氟苯基)-2-丙烯亚基)哌嗪-2,5-二酮，具有式I所示的结构：

其特征在于，所述方法包括以下步骤：

(1)制备供试品溶液

取供试品与体积比为80∶20的乙腈-水溶液混合制成浓度为0.1～0.45mg/ml的溶液，作为供试品溶液；

所述的供试品为含所述微管蛋白抑制剂的原料、粗品或者注射剂；所述的供试品同时包含下述杂质：

杂质A：具有式II所示结构；

杂质B：具有式III所示结构；

杂质C：具有式IV所示结构；

杂质D：具有式V所示结构；

杂质E：具有式VI所示结构；

杂质F：具有式VII所示结构；

(2)制备对照品溶液

取所述的微管蛋白抑制剂与体积比为80∶20的乙腈-水溶液混合制成浓度为0.001～0.0045mg/ml的溶液对照品溶液；

(3)采用高效液相色谱检测供试品和对照品

检测条件为：

色谱柱Zorbax Eclipse XDB-C18柱，

柱温25～45℃，

检测波长375±2nm，

流速为0.8～1.3ml/min，

流动相：以体积比为90∶10的磷酸盐缓冲液-乙腈为流动相A，以乙腈为流动相B，梯度洗脱，pH值为4.5～8.5，所述的磷酸盐缓冲液的浓度为0.01～0.05mol/L；

其中所述的梯度洗脱为：

第0～5分钟，线性等度洗脱，流动相A的比例保持71％～75％不变，流动相B的比例保持25％～29％不变；

第5～10分钟，线性梯度洗脱，流动相A的比例从71％～75％变化为61％，流动相B的比例从25％～29％变化为39％；

第10～40分钟，线性梯度洗脱，流动相A的比例从61％变化为44％，流动相B的比例从39％变化为56％；

第40～45分钟，等度洗脱，流动相A的比例保持44％不变，流动相B的比例保持56％不变；

第45～55分钟，流动相A的比例保持71％～75％不变，流动相B的比例保持25％～29％不变。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述的磷酸盐为磷酸二氢钾。

3.根据权利要求2所述的方法，其中所述的磷酸二氢钾的浓度为0.01mol/L，pH值为6.8。

4.根据权利要求1所述的方法，其中所述的柱温为28～32℃。

5.根据权利要求1所述的方法，其中所述的柱温为30℃，流速为1.2ml/min，检测波长为375nm。

6.根据权利要求1所述的方法，其中所述的供试品溶液的浓度为0.3mg/ml，对照品溶液的浓度为0.003mg/ml。