[发明专利]一种用于检测甘薯茎腐病菌的引物对及其检测方法有效
| 申请号： | 201810667966.9 | 申请日： | 2018-06-26 |
| 公开（公告）号： | CN108588249B | 公开（公告）日： | 2020-06-19 |
| 发明（设计）人： | 吴秀芹;洪纤纤;杨敏;姚榕;王艳丽;孙国昌;安千里;李斌 | 申请（专利权）人： | 浙江大学 |
| 主分类号： | C12Q1/689 | 分类号： | C12Q1/689;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/01 |
| 代理公司： | 杭州天勤知识产权代理有限公司 33224 | 代理人： | 韩聪 |
| 地址： | 310013 浙江*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 用于 检测 甘薯 病菌 引物 及其 方法 | ||
1.引物对在鉴定达旦提狄克氏菌(Dickeya dadantii)中的应用，其特征在于，所述引物对包括上游引物和下游引物，其核苷酸序列分别为：
上游引物：5'-CATATCAACCAGACCAGCCGTT-3'；
下游引物：5'-CGGCCTGCTTTAAACAACGTATTA-3'。
2.一种检测甘薯茎腐病菌的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)提取待检样品DNA；
(2)采用引物对，建立PCR反应体系，进行PCR扩增；
所述引物对包括上游引物和下游引物，其核苷酸序列分别为：
上游引物：5'-CATATCAACCAGACCAGCCGTT-3'；
下游引物：5'-CGGCCTGCTTTAAACAACGTATTA-3'；
(3)对PCR产物进行检测和判断，
如扩增产物中出现167bp的条带，则说明待检样品中具有甘薯茎腐病菌Dickeyadadantii；否则，说明待检样品中不具有甘薯茎腐病菌。
3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述的待检样品为甘薯块茎、甘薯苗、甘薯茎。
4.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述PCR反应体系，以25μL体系计，包括：2×Taq PCR MasterMix 12.5μL、10μmol/L上下游引物各1μL、DNA模板1μL，灭菌双蒸水9.5μL。
5.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述PCR扩增条件：94℃预变性3min；94℃变性30s，56℃退火30s，72℃延伸10s，35个循环；72℃延伸5min，4℃终止反应。
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