[发明专利]PCV-3免疫评价与野毒感染诊断的免疫速测试剂盒

说明书

本发明涉及一种用于圆环病毒3型(PCV‑3)免疫评价与野毒感染诊断的免疫速测试剂盒及其制备方法。该试剂盒基于膜免疫层析的原理，采用胶体金双抗原夹心法来制备，以链球菌G蛋白(SPG)为捕获抗原，以PCV‑3的衣壳蛋白(Cap)和复制酶蛋白(Rep)为检测抗原。在检测一份血清样品时，可同时诊断PCV‑3野毒感染，并评价PCV‑3Cap基因工程亚单位疫苗或病毒样颗粒疫苗的免疫效果。该试剂盒不使用仪器设备，操作便捷，结果判读简单，能够满足基层农户以及动物疫病防疫部门对于新出现的PCV‑3的诊断与检测需求，对新发PCV‑3的防控具有重要意义。

技术领域

本发明总体涉及动物疫病快速诊断领域，具体涉及一种用于区分新发PCV-3Cap基因工程亚单位疫苗或病毒样颗粒疫苗与野毒感染的免疫速测试剂盒。

背景技术

猪圆环病毒(Porcine circoviruses,PCV)是一种无囊膜的单链环状DNA病毒，猪圆环病毒(PCV)粒子直径17-22nm，是目前兽医学上发现的最小的动物病毒。2016年以前，在猪群中仅发现PCV-1和PCV-2两个基因型。其中，PCV-1对猪无致病性，而PCV-2在猪场能引起呼吸、繁殖、消化等多系统症状，对养猪业造成重大的经济损失。2016年，美国堪萨斯州立大学研究人员Palinski等利用宏基因组测序技术从皮炎肾病综合征(PDNS)和繁殖障碍母猪及其流产胎儿体内鉴定出一种新的圆环病毒，并命名为PCV-3，美国多个洲猪群中随即被证实存在PCV-3感染。波兰、韩国、泰国等也报道了猪群中存在PCV-3的感染。随后，我国科研人员也相继检测到PCV-3，已有至少13个省猪场存在PCV-3感染，且主要分布于中东部地区。

市场上流行的PCV-2疫苗主要是Cap基因工程亚单位疫苗和全病毒灭活疫苗，其中Cap亚单位疫苗的出现对于PCV-2的防控起到关键作用，使用该疫苗能够区分疫苗免疫与野毒感染。鉴于此，PCV-3的Cap蛋白也将成为开发PCV-3新型诊断技术的一个重要抗原。当前，有关PCV-3报道的文献主要集中在流行病学、分子诊断和序列分析等相关的研究，没有关于免疫诊断技术开发的报道，也没有免疫诊断产品投入市场。

PCV基因组含有四个编码阅读框(ORFs)，其中ORF1编码病毒的复制酶相关蛋白(Rep)，Rep是圆环病毒复制必须的非结构蛋白，ORF2编码病毒唯一的衣壳结构蛋白(Cap)。应用Cap亚单位疫苗或病毒样颗粒疫苗防控PCV疫情时，被免疫动物不会产生Rep蛋白抗体。因此，Cap和Rep蛋白是开发PCV-3免疫诊断技术及产品的重要靶标，特别是开发能够评价PCV-3疫苗免疫效果，同时能够区分Cap亚单位疫苗或病毒样颗粒疫苗与野毒感染的新型免疫诊断技术及产品具有重大的临床应用价值。

发明内容

本发明的目的在于：提供一种用于PCV-3型免疫评价与野毒感染诊断的免疫速测试剂盒及其制备方法，该试剂盒可同时评价PCV-3疫苗免疫效果，并区分PCV-3的Cap亚单位疫苗或病毒样颗粒疫苗与野毒感染。

本发明通过以下技术方案实现：该试剂盒包括免疫速测卡、血清稀释液、移液管和干燥剂；所述免疫速测卡包括扇形底板，在扇形底板的相对两边表面上分别沿径向设有检测试纸I和检测试纸II，在扇形底板的圆心处设有金标孔，邻近金标孔设置有加样孔，加样孔分别通过第I样品引流道和第II样品引流道与检测试纸I和检测试纸II连接。

其中，检测试纸I设置有检测线和质控线，分别包被PCV-3Cap蛋白和兔免疫球蛋白IgG抗体；检测试纸II设置有检测线和质控线，分别包被PCV-3Rep蛋白和兔免疫球蛋白IgG抗体；金标孔中包被有链球菌G蛋白(SPG)胶体金颗粒标记偶联物。