[发明专利]高酶活发酵液的培养方法及提取耐酸α-淀粉酶的方法

说明书

本发明涉及一种高酶活发酵液的培养方法及提取耐酸α‑淀粉酶的方法，所述高酶活发酵液的培养方法中，通过优化一级种子培养和发酵培养的培养基配比、调高培养温度、控制溶氧、增加补料工艺，充分满足了菌株生长代谢需要，创造了一个更有利于菌株生长的微环境。最终制备的高酶活发酵液中提取的耐酸α‑淀粉酶的酶活达到75000‑80000U/mL，较一般酶活25000U/mL成倍提高，且耐酸性更好，pH应用范围为4.5‑6，同时大幅降低了发酵原辅材料生产成本，使得该酶的推广应用有了更广阔的空间，具有极大的社会和经济价值。

技术领域

本发明涉及生物酶制剂的生产方法，特别是涉及一种高酶活发酵液的培养方法及提取耐酸α-淀粉酶的方法。

背景技术

耐酸α-淀粉酶是指在酸性条件下能水解淀粉的一种酶类，它可以在较低pH的条件下液化淀粉，保持酶的高活性。耐酸α-淀粉酶显著的耐酸性使其具有较大的应用空间和潜力，广泛应用于食品、发酵、纺织、饲料、医药等行业，可以明显地提高收得率，降低能源消耗。

目前国内科研院所和生产企业研究和生产的耐酸α-淀粉酶普遍存在着酶活低，对原辅料要求精细、消耗高等问题，较高的酶活仅达到25000U/mL，严重的影响了该产品的推广和企业的经济效益。

发明内容

为了解决现有技术中存在的上述问题，本发明提供一种高酶活发酵液的培养方法及提取耐酸α-淀粉酶的方法。

本发明的技术方案为：

一种高酶活发酵液的培养方法，包括如下步骤：

(S1)斜面培养：将菌株接种至斜面培养基中进行培养，得到生产菌株；

(S2)种母液培养：取步骤(S1)所述生产菌株，接种至种母液培养基中进行培养，得到种母液；

(S3)一级种子培养：取步骤(S2)所述种母液，接种至一级种子培养基中进行培养，得到一级种子；

所述一级种子培养的培养基的原料组分包括：

玉米浆干粉12-20重量份、豆粕18-25重量份、消泡剂1.5-3重量份、硫酸镁3-5重量份、磷酸二氢钾4-9重量份、磷酸氢二钾30-50重量份、硫酸亚铁0.015-0.025重量份、氯化锰0.002-0.006重量份、氯化锌0.005-0.008重量份、葡萄糖15-25重量份、水800-950重量份；

所述一级种子的培养方法，包括如下步骤：

将除葡萄糖以外的各原料充分混合，依次进行调节pH、灭菌、冷却，得到灭菌冷却后的混合料；将葡萄糖灭菌、冷却后，得到灭菌冷却后的葡萄糖；将所述灭菌冷却后的葡萄糖加入所述灭菌冷却后的混合料中，定容，得到灭菌冷却后的一级种子培养的培养基；无菌条件下在所述培养基上接种种母液，经培养后，得到一级种子；

(S4)发酵培养：取步骤(S3)所述一级种子，接种至发酵培养基中进行培养，得到高酶活发酵液；

所述发酵培养的培养基的原料组分包括：

玉米浆干粉10-25重量份、豆粕12-18重量份、消泡剂0.6-1.2重量份、硫酸镁3-5重量份、磷酸二氢钾5-9重量份、磷酸氢二钠30-60重量份、硫酸亚铁0.02-0.03重量份、氯化锰0.002-0.005重量份、硫酸锌0.006-0.008重量份、葡萄糖10-30重量份、水800-950重量份；

所述发酵培养的方法，包括如下步骤：