[发明专利]高酶活发酵液的培养方法及提取耐酸α-淀粉酶的方法

权利要求书

1.一种高酶活发酵液的培养方法，其特征在于，包括如下步骤：

(S1)斜面培养：将菌株接种至斜面培养基中进行培养，得到生产菌株；

(S2)种母液培养：取步骤(S1)所述生产菌株，接种至种母液培养基中进行培养，得到种母液；

(S3)一级种子培养：取步骤(S2)所述种母液，接种至一级种子培养基中进行培养，得到一级种子；

所述一级种子培养的培养基的原料组分包括：

玉米浆干粉12-20重量份、豆粕18-25重量份、消泡剂1.5-3重量份、硫酸镁3-5重量份、磷酸二氢钾4-9重量份、磷酸氢二钾30-50重量份、硫酸亚铁0.015-0.025重量份、氯化锰0.002-0.006重量份、氯化锌0.005-0.008重量份、葡萄糖15-25重量份、水800-950重量份；

所述一级种子的培养方法，包括如下步骤：

将除葡萄糖以外的各原料充分混合，依次进行调节pH、灭菌、冷却，得到灭菌冷却后的混合料；将葡萄糖灭菌、冷却后，得到灭菌冷却后的葡萄糖；将所述灭菌冷却后的葡萄糖加入所述灭菌冷却后的混合料中，定容，得到灭菌冷却后的一级种子培养的培养基；无菌条件下在所述培养基上接种种母液，经培养后，得到一级种子；

(S4)发酵培养：取步骤(S3)所述一级种子，接种至发酵培养基中进行培养，得到高酶活发酵液；

所述发酵培养的培养基的原料组分包括：

玉米浆干粉10-25重量份、豆粕12-18重量份、消泡剂0.6-1.2重量份、硫酸镁3-5重量份、磷酸二氢钾5-9重量份、磷酸氢二钠30-60重量份、硫酸亚铁0.02-0.03重量份、氯化锰0.002-0.005重量份、硫酸锌0.006-0.008重量份、葡萄糖10-30重量份、水800-950重量份；

所述发酵培养的方法，包括如下步骤：

将除葡萄糖以外的各原料充分混合，依次进行调节pH、灭菌、冷却，得到灭菌冷却后的混合料；将葡萄糖灭菌、冷却后，得到灭菌冷却后的葡萄糖；将所述灭菌冷却后的葡萄糖加入所述灭菌冷却后的混合料中，定容，得到灭菌冷却后的发酵培养的培养基；无菌条件下在所述灭菌冷却后的发酵培养的培养基上接种一级种子，经培养后，得到初步发酵液；向所述初步发酵液中加入灭菌冷却后的补料，继续培养，即得到所述的高酶活发酵液。

2.根据权利要求1所述的高酶活发酵液的培养方法，其特征在于，

步骤(S3)中，进行所述一级种子培养时，调节所述pH至7.3-7.6；所述灭菌的温度为121-123℃，所述灭菌的时间为30-50min；所述定容为定容至1m³；控制所述培养的温度为42-44℃，控制所述搅拌的速度为140-180rpm，控制所述培养的压力为0.07-0.10MPa；所述培养的时间为10-16h。

3.根据权利要求1所述的高酶活发酵液的培养方法，其特征在于，

步骤(S4)中，进行所述发酵培养时，调节所述pH至7.3-7.6；所述灭菌的温度为121-123℃，所述灭菌的时间为30-50min；所述定容为定容至10m³；控制所述培养的温度为42-44℃，控制所述搅拌的速度为110-140rpm，控制所述培养的压力为0.04-0.08MPa；所述培养的时间为10-18h；所述培养为培养至溶氧20-30；所述发酵培养的补料，由葡萄糖35-65重量份、蔗糖2-10重量份、余量为水组成；所述补料灭菌的温度为121-123℃，灭菌的时间为25-40分钟，所述补料冷却至70℃以下然后定容至3m³；控制所述补料的加入速度为20-30L/h，控制所述溶氧为30以上，控制所述pH为6.40-6.85，继续所述培养的时间为65-77h。

4.根据权利要求1-3任一项所述的高酶活发酵液的培养方法，其特征在于，所述斜面培养的菌株为地衣芽孢杆菌，所述斜面培养的培养温度为38℃，所述斜面培养的培养时间为18-26h。

5.根据权利要求1-3任一项所述的高酶活发酵液的培养方法，其特征在于，所述斜面培养的培养基的原料组分包括：乳糖1-3重量份、蛋白胨1.5-2重量份、酵母膏0.3-0.8重量份、氯化钠0.3-0.6重量份、琼脂粉1.4-1.8重量份。