[发明专利]一种硅藻荧光染色液及检测脏器组织的硅藻检验方法

说明书

本发明公开一种硅藻荧光染色液，由以下重量百分比的组分组成：荧光素8‑12%、媒染剂（铝盐）3‑7%、氢氟酸0.1‑0.5%，其余为去离子水。同时提供检测脏器组织的硅藻检验方法。本发明硅藻荧光染色液有助于硅藻形态的展现，硅藻中硅质被氢氟酸溶解，使胶质层暴露出来，媒染剂（铝盐）促使荧光素标记到胶质层上，在对应波长的荧光显微镜下观察，在紫外光的激发下，硅藻的轮廓清晰的表现出来。

技术领域

本发明属于硅藻检验技术领域，具体涉及一种硅藻荧光染色液及检测脏器组织的硅藻检验方法。

背景技术

溺死是法医学实践中的常见案件类型，亦是法医学检验的难点问题之一。在检案实践中，判断水中尸体是生前入水溺死还是死后抛尸入水，以及落水地点等情况时，硅藻的实验室检查尤为重要。

溺死尸体硅藻检验的相关研究主要集中于溺水尸体器官组织中是否存在硅藻、检出硅藻的种类等法医学关注的议题，但长期以来硅藻检验方法的研究进展较为缓慢，近年，随着生物科学领域技术方法的突飞猛进，硅藻检验方法又开始成为研究的热点之一。

目前常用硅藻检验基本上可分为：基于形态学观察方法、基于DNA 序列的分子种属鉴定方法、基于硅藻化学元素组成差异的鉴定方法等类型。

硅藻种类繁多，共同特征是细胞壁中含有不易被破坏的含水硅酸盐成分，在浓酸中煮沸或高温烧灼均不会发生明显破坏，基于这一特征，通过对提取的器官组织进行破坏后可留下硅藻，经显微镜形态学观察确定是否存在硅藻即是基于形态学观察方法。该类方法操作简单、仪器要求低，因而在检案中得到了广泛的研究与应用，在法医学硅藻检验中发挥着较大的作用。这类检验方法主要包括化学消化法和物理破坏法。化学消化法通过强酸消化、离心富集硅藻以及光学显微镜观察等步骤获取硅藻，该方法由于具有消化完全、操作简单、成本较低等优点，是目前最常用的硅藻检测方法。但由于硅藻的细胞壁由硅质（SiO₂·nH₂O）和果胶质（pectin）组成，而硅质在外层包裹住了胶质层，由于硅质的影响，因此，该方法中硅藻一般不易被染色，从而导致硅藻的形态展现不完全，影响对尸体的判断。

发明内容

本发明目的在于提供一种硅藻荧光染色液，同时提供采用该染色液检测脏器组织的硅藻检验方法是本发明的另一发明目的。

基于上述目的，本发明采取以下技术方案：

一种硅藻荧光染色液，由以下重量百分比的组分组成：荧光素8-12%、媒染剂3-7%、氢氟酸0.1-0.5%，其余为去离子水。

硅藻荧光染色液，由以下重量百分比的组分组成：荧光素10%、媒染剂5%、氢氟酸0.3%，其余为去离子水；媒染剂为铝盐。

采用硅藻荧光染色液检测脏器组织的硅藻检验方法，包括以下步骤：

1）将脏器组织硝解后制得的消化液涂于载玻片上，干燥制得待检组织涂片，向待检组织涂片上滴加硅藻荧光染色液，于35-40°C下，保温15-30min，冲洗，于60-80°C下，干燥4-6min；

2)向步骤1）干燥后的待检组织涂片滴加脱色液，静置3-5s，冲洗，于60-80°C下，干燥4-6min，所述待检组织涂片上的消化液、硅藻荧光染色液与脱色液的体积用量比为（90-110）μL︰（90-110）μL︰（90-110）μL。

步骤1）脏器组织为肺组织，向步骤2）干燥后的待检组织涂片滴加复染液，静置3-5s，冲洗，于60-80°C下，干燥4-6min，得待检样品；复染液由以下重量百分比的组分组成：高锰酸钾1.5-2.5%、双氧水0.4-0.7%，其余为去离子水，所述待检组织涂片的消化液与复染液的体积用量比为（90-110）μL︰（90-110）μL。

所述脱色液由以下重量百分比的组分组成：盐酸5-7%、乙醇75-85%，其余为去离子水。