[发明专利]一种高纯度甜菊糖苷RD和RM的制备方法

说明书

本发明涉及一种高纯度甜菊糖苷RD和RM的制备方法，具体步骤如下：（1）将树脂分散于乙醇和水的混合溶液中搅匀，并装入至色谱柱中，用乙醇和水的混合溶液冲洗压实色谱柱床；（2）取甜菊糖苷母液糖浓液稀释成母液糖稀释液；（3）将步骤（2）得到的样品液连续流过色谱柱；（4）待上样结束后，用超声水冲洗色谱柱；（5）色谱柱平衡结束后，以乙醇和水的混合溶液为洗脱液对色谱柱进行洗脱，检测纯度；将纯度合格的收集液合并，得到收集液；（6）将收集液浓缩，得到浓缩液；（7）将浓缩液重结晶，可得到RD和RM；本发明公开了Super 200‑X19树脂以超纯水为上样液，乙醇和水的混合溶液为洗脱液，对甜菊糖苷提取后的母液糖混合液中的RD和RM进行有效提取。

技术领域

本发明涉及一种高纯度甜菊糖苷RD和RM的制备方法，属于天然化学领域。

背景技术

甜叶菊原产于巴拉圭瓜拉尼，上世纪30年代初有科研人员从其叶子中提取出具有甜味的物质即甜菊糖苷。甜菊糖苷含有多种不同成分的四环二萜类单体，根据不同程度的糖基化修饰后可以得到不同程度的甜味口感。甜菊糖苷类化合物中含量相对丰富的甜菊苷（Stevioside，STV）、莱鲍迪甙A (RA)等已广泛应用于饮料、食品、调味品、乳制品等领域。虽然甜菊苷和莱鲍迪甙A(RA)具有高甜度，但在口感上还存在除甜味以为的后苦味，相比之下，莱鲍迪甙D(RD)和莱鲍迪甙M(RM)具有更好的口感特性。

目前国际上主要关照甜菊糖苷中STV、RA等单一组分的提纯方法的研究，因此存在大量的甜菊糖苷结晶的母液糖（提取RA、STV后的转晶母液糖）需要处理。如果能够利用甜菊糖苷结晶母液糖为原料，继续提取出RD和RM，则能充分地利用原料且能够取得更大的经济效益。有中国专利（CN201711154894.X）提供了一共重结晶方法：依次使用乙醇和甲醇对母液糖干粉进行重结晶，但此过程中必须使用大量的甲醇和乙醇，则必然产生大量的有机溶剂废液，且重结晶过程需要进行多次，过程繁琐且能耗较大，不利于进行工业化生产。

发明内容

本发明针对现有技术中存在的不足，提供了一种高纯度甜菊糖苷RD和RM的制备方法，以解决现有技术中存在的问题。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

一种高纯度甜菊糖苷RD和RM的制备方法，具体步骤如下：其中部件的关系。

（1）色谱柱装柱、冲洗：将树脂分散于乙醇和水的混合溶液中，搅拌均匀，并装入至色谱柱中，用乙醇和水的混合溶液冲洗压实色谱柱床并浸泡2h，超纯水冲洗至流出液无醇味；

（2）样品制备：取甜菊糖苷母液糖浓液并用超纯水稀释，制成母液糖稀释液，备用；

（3）上样：将步骤（2）得到的样品液连续流过色谱柱；

（4）平衡：待上样结束后，用超声水冲洗色谱柱；

（5）洗脱：色谱柱平衡结束后，以乙醇和水的混合溶液为洗脱液对色谱柱进行洗脱，根据UV检测情况，收集流出液，检测纯度；将纯度合格的收集液合并，得到收集液；

（6）浓缩：将收集液浓缩，得到浓缩液；

（7）重结晶：将浓缩液重结晶，可得到RD和RM；

作为本发明的一种改进，所述步骤（1）中树脂为Super 200-X19球形材料。

作为本发明的一种改进，所述步骤（1）乙醇和水的混合溶液中乙醇和水的体积比为1-89:9；乙醇和水的混合溶液中乙醇的浓度为90%。

作为本发明的一种改进，所述步骤（1）中用乙醇和水的混合溶液冲洗色谱柱的速度为每小时1-4倍的柱体积。

作为本发明的一种改进，所述步骤（2）中母液糖稀释液的浓度为2-50%。