[发明专利]肠道菌群的荧光检测试剂盒

说明书

本发明是一种利用纳米磁珠提纯粪便样品结合荧光流式细胞术检测肠道菌群的方法。在本发明中，提供了针对艰难梭菌、沙门氏菌、志贺氏菌、空肠弯曲菌、肠出血性大肠杆菌、肠炎弧菌和鼠疫杆菌的特异性DNA探针序列，利用偶联于探针序列上的荧光物质，通过微流控技术检测肠道菌群。本发明的检测方法具有快速，准确，灵敏度高等优点。

技术领域

本发明属于生物诊断和检测领域，涉及一种肠道菌群的分子生物学检测方法，特别是涉及一种利用DNA荧光探针的检测技术、检测菌群DNA的试剂盒及应用。

背景技术

在人体肠道中定居有大量细菌，即肠道菌群，这些肠道菌群被认为在人体中具有重要的作用，能极大的影响人体身体健康，是许多慢性疾病，如肥胖症、糖尿病等的重要诱因。最新的研究表明，肠道菌群的变化与帕金森等神经退行性疾病，甚至抑郁症等都有密切的关系，调整肠道菌群可能是一个新的治疗此类疾病的方向。因此，建立准确，快速的肠道菌群的检测系统和方法具有重要意义。

现有的肠道菌群检测中，标本的采集基本为新鲜粪便样品。肠道菌群的研究方法主要有传统法和分子生物学的方法。传统法的培养法和镜鉴法是早期的肠道菌群研究方法。其中细菌的实验室培养，耗时长，并且肠道菌群的种类繁多，在实验室中难于快速高效地培养，为检测增加了难度。分子生物学技术检测粪便中细菌基因组DNA，是当前研究人体肠道菌群的重要方法。对DNA的检测方法，目前常采用的是对目标基因进行PCR扩增，对扩增产物进行定性，检测肠道菌群中目标DNA的存在与否，来判断被检测的细菌是否存在。对扩增产物定性的检测方法包括：凝胶电泳、核酸分子杂交、测序等。所述这些方法，需要多个步骤，包括DNA提取、PCR、电泳或杂交、成像检测等，通常需要6‐7个小时；并且这些方法需要较多的专用性仪器，例如PCR仪、电泳仪、基因芯片、荧光成像装置等。

目前，仍然需要开发肠道菌群的快速检测方法及检测产品。

发明内容

本发明通过实验研究，针对肠道菌群中具有临床重要意义的菌群，开发了特异性高的DNA探针，进一步在所述探针上连接荧光基团，通过所述DNA荧光探针与目标菌群的目的DNA杂交，利用荧光流式细胞技术，通过检测荧光的有无，实现直接检测细菌DNA的目的，高效、快速、简便。

本发明的一个目的是提供用于肠道菌群检测的DNA探针。本发明的另一个目的是提供含有所述DNA探针的DNA荧光探针。本发明的再一个目的是提供利用所述DNA探针或DNA荧光探针检测肠道菌群的方法。

本发明的技术方案如下：

DNA探针，其为分离的核酸。

所述分离的核酸，包括SEQ ID No.1、SEQ ID No.2、SEQ ID No.3、SEQ ID No.4、SEQ ID No.5、SEQ ID No.6、SEQ ID No.7、SEQ ID No.8、SEQ ID No.9、或SEQ ID No.10。

分离的核酸，包括SEQ ID No.1、或SEQ ID No.2。即使存在肠道菌群中的其他细菌，所述核酸也可以选择性地与艰难梭菌的DNA杂交。

分离的核酸，包括SEQ ID No.3。即使存在肠道菌群中的其他细菌，所述核酸也可以选择性地与沙门氏菌的DNA杂交。

分离的核酸，包括SEQ ID No.4。即使存在肠道菌群中的其他细菌，所述核酸也可以选择性地与志贺氏菌(Shigella)的DNA杂交。

分离的核酸，包括SEQ ID No.5、或SEQ ID No.6。即使存在肠道菌群中的其他细菌，所述核酸也可以选择性地与空肠弯曲菌(Campylobacter)的DNA杂交。

分离的核酸，包括SEQ ID No.7、或SEQ ID No.8。即使存在肠道菌群中的其他细菌，所述核酸也可以选择性地与肠出血性大肠杆菌(enterohaemorrhagic E.coli,，EHEC)的DNA杂交。