[发明专利]一种GII.8型诺如病毒基因组扩增引物和扩增方法

权利要求书

1.一种GII.8型诺如病毒基因组扩增引物，其特征在于，包括六对扩增引物和两条基因组末端的测序引物：

扩增引物对1 ：

II-1F：5'-GTGAATGAAGATGGCGTCTAAC-3'；

II.8-1R：5'-CTGTAGGCATCCCAGTGATC-3'；

扩增引物对2 ：

II.8-2F：5'-TCATCTTCGCCTGACATCGT-3'；

II.8-2R：5'-TCCTCTTCACAGAAGTTCTC-3'；

扩增引物对3 ：

II.8-3F：5'-CACACTGCATTCTCCAGCAA-3'；

II.8-3R：5'-CAATCCTCCAAATGCCCGA-3'；

扩增引物对4 ：

II.8-4F：5'-GAGGAAGCCAAGAAGACAGT-3'；

II-4R：5'-CCRCCNGCATRHCCRTTRTACAT-3'；

扩增引物对5 ：

II-5F：5'-GGAGGGCGATCGCAATC-3'；

II-5R：5'-CCRGCRAAGAAAGCTCCAGCCAT-3'；

扩增引物对6 ：

II.8-6F：5'-TCYAACAGTGGGGACCACC-3'；

II.8-6R：5'-TCACTAAGCCCGTGACTCC-3'；

测序引物 ：

II.8-seq1R：5'-AACTCACCATCCCACATCTC-3'；

II.8-seq6F：5'- GACAAGGAGATGTTGAATGC-3'；

R代表A/G，H代表A/C/T，N代表碱基A/C/T/G，Y代表C/T。

2.一种GII.8型诺如病毒基因组扩增方法，其特征在于，分别以权利要求1所述的六对扩增引物作为上下游引物，以GII.8型诺如病毒的RNA为模板进行RT-PCR扩增，分别得到扩增产物，然后采用权利要求1所述的每对扩增引物和测序引物II.8-seq1R、II.8-seq6F分别对相对应的扩增产物进行核酸序列测序，再通过拼接比对，获得GII.8型诺如病毒基因组全长序列。

3. 根据权利要求2所述的扩增方法，其特征在于，所述的RT-PCR，其反应体系为：含有2×one-step RT-PCR mixture 10μL，10μmol/L上游引物和10μmol/L 下游引物各0.6μL，MLV/RNasin/HS-Taq酶混合液0.8μL，RNA模板2μL，其余由双蒸水补足至20μL；反应条件为：50℃反转录30min，94℃预变性3min，然后94℃ 30s，55℃ 30s，72℃ 75s，共30次循环后，最后72℃延伸7min。