[发明专利]沙门菌、李斯特菌、大肠杆菌O157的检测引物及方法

权利要求书

1.沙门菌、李斯特菌、大肠杆菌O157的检测引物及方法，其特征在于包括5对引物，引物序列如下：

rfbE上游引物F1：5’-CGTAAGAGGGACCGTAGA-3’(SEQ ID No.1)，

rfbE下游引物F2：5’-TGGCTGGATTATCGTTTG-3’(SEQ ID No.2)，

fliC上游引物F3：5’-GCTGTCGAGTTCTATCGAG-3’(SEQ ID No.3)，

fliC下游引物F4：5’-GTGACTTTATCGCCATTCC-3’(SEQ ID No.4)，

stx1上游引物F5：5’-ACGAGGGCTTGATGTCTA-3’(SEQ ID No.5)，

stx1下游引物F6：5’-GTAAGGCTTCTGCTGTGA-3’(SEQ ID No.6)，

invA上游引物F7：5’-TTTCAATGGGAACTCTGC-3’(SEQ ID No.7)，

invA下游引物F8：5’-AACGACGACCCTTCTTTT-3’(SEQ ID No.8)，

hly上游引物F9：5’-TGATTTGCCAGGTATGAC-3’(SEQ ID No.9)，

hly下游引物F10：5’-TTTCCCTTCACTGATTGC-3’(SEQ ID No.10)。

2.根据权利要求1所述的多重PCR检测方法，其特征在于每25μL PCR反应体系中含有以下组分：10×PCRbuffer 2.5ul，25mmol/LMgCl₂0.5-2μL，Taq DNA聚合酶1.5-2U，2.5mmol/LdNTPs 2-5ul，DNA模版1-2ul，每条引物各0.15-0.5ul，灭菌双蒸水补足体积至25ul，设阳性对照、阴性对照和空白对照(蒸馏水)，将上述PCR反应液添加到反应管中，置PCR仪中进行扩增，扩增程序为94℃变性5min，然后94℃预变性45s，50-55℃退火45s，72℃延长45s，共扩增30-35个循环，最后72℃延伸5min，反应结束后取PCR产物，在1-2％的琼脂糖凝胶上电泳，电泳结束后将凝胶置紫外成像仪中观察结果。

3.根据权利要求1所述的检测引物和检测方法，其特征在于在检测临床样品里存在的沙门氏菌、单增李斯特菌、肠出血性大肠杆菌O₁₅₇中的应用。