[发明专利]PCR纯化试剂及使用该试剂纯化PCR产物的方法

说明书

本发明公开了一种PCR纯化试剂及使用该试剂纯化PCR产物的方法，PCR纯化试剂，包括DNA结合液和洗涤液，所述DNA结合液的配方为：3mol/L氯化钠、体积浓度为30％的乙醇；洗涤液的配方为：10mmol/L Tris.HCl、100mmol/L NaCl、1mmol/L EDTA、体积浓度80％乙醇，Tris.HCl的pH值为8.0。本发明的PCR纯化试剂可以成功用于DNA的纯化而不影响DNA纯化的产量。本发明的PCR纯化试剂与再生硅柱一起使用，可以减少一次性商业试剂盒的使用数量，减少实验室垃圾的产生，保护环境，节约社会资源和使用费用。

技术领域

本发明属于生物试剂领域，具体涉及一种PCR纯化试剂及使用该试剂纯化PCR产物的方法。

背景技术

基因克隆是二十世纪最伟大的发明之一，广泛应用于许多研究领域包括生物，医学，农业，生物制药等。基因克隆是利用具有复制能力的载体或质粒将获得的目的基因或DNA(脱氧核糖核酸)片段与载体在体外进行连接形成重组载体并将之转化宿主细菌进行复制，通过菌体培养、繁殖和提取质粒等步骤获得大量重组DNA的过程。基因克隆包含一系列实验步骤，包括目的基因的扩增与纯化，限制性酶酶切反应与琼脂糖凝胶电泳，DNA胶抽提与连接反应，细菌的转化、培养和质粒提取等步骤。目前，研究者通常采用两种主要的方法完成基因克隆，即采用纯手工方法或者采用商业试剂盒与手工相结合的方法。纯手工方法费时费力，实验进展慢；而采用商业试剂盒与手工结合的方法，可加速实验的进程。在基因克隆过程中PCR(Polymerase Chain Reaction-聚合酶链式反应)纯化试剂盒常用于PCR产物纯化。经PCR纯化的DNA不仅纯度高，而且增加随后的酶切反应的效率，因此，使用PCR试剂盒具有省时、省力，加快基因克隆等效果。由于PCR纯化试剂盒是全球绝大多数实验室常使用的试剂盒，每年消耗的PCR试剂盒数量很大，而且PCR纯化试剂盒被设计和制备成一次性使用；因此，使用试剂盒，一方面，不仅产生大量实验室垃圾，造成环境污染；另一方面，也对实验室产生沉重经济负担。因此，本发明的目的是通过使用可持续的实验室自配的PCR产物纯化试剂从而减少研究中PCR试剂盒的使用量，减少实验室垃圾，为保护环境，节约资源和资金提供方法。

发明内容

本发明所要解决的技术问题为：如何提供一种PCR纯化试剂，解决现有的PCR纯化试剂盒一次性使用造成环境和浪费的问题。

本发明的技术方案为：PCR纯化试剂，包括DNA结合液和洗涤液，所述DNA结合液的配方为：3mol/L氯化钠、体积浓度为30％的乙醇；洗涤液的配方为：10mmol/L Tris.HCl、100mmol/L NaCl、1mmol/L EDTA、体积浓度80％乙醇，Tris.HCl的pH值为8.0

本发明还公开了一种PCR产物纯化试剂与硅柱一起使用、纯化DNA的方法，包括以下步骤

(1)将PCR产物转移至无菌离心管中，向离心管加入5倍体积的上述所述的DNA结合液并用移液枪将PCR产物与DNA结合液彻底匀；

(2)将PCR产物混合液转移至PCR产物纯化用的硅柱中，置于离心机中以12000rpm速度离心1分钟，弃收集管中废液；

(3)向硅柱中加入上述所述的洗涤液，置于离心机中以12000rpm速度离心1分钟，弃收集管中废液；将硅柱重置于离心机中，以相同的速度离心1分钟，去除硅柱中的残留液；

(4)将硅柱转移至无菌离心管中，向硅柱中加入去离子蒸馏水，将硅柱与离心管转移至离心机中以12000rpm速度离心1分钟；

(5)将洗脱的DNA进行定量和琼脂糖凝胶电泳检测。

进一步地，为了达到本发明节约材料的目的，硅柱为再生硅柱。

进一步地，再生硅柱采用专利申请号：201710437190.7中权利要求2的方法制备，即：