[发明专利]蛋白质MUC13在制备诊断肝内胆管癌的试剂中的应用

说明书

本发明公开了蛋白质MUC13在制备诊断肝内胆管癌的试剂中的应用。本发明利用人蛋白质组芯片高通量、快速分析的优势，分析了肝内胆管癌患者相关血清，在较短时间内比较了肝内胆管癌病人和健康人样品中的不同，结果发现MUC13蛋白的表达水平在肝内胆管癌病人中的表达水平明显高于健康人，提示MUC13蛋白可作为肝内胆管癌的候选血清生物标志物，以期早期诊断和有效治疗肝内胆管癌。试验证明，本发明提供的血清标志物MUC13的特异性为90％，敏感性为91.67％，具有高特异性和高敏感性的特点。进一步的，本发明还提供一种灵敏、安全、可靠、易操作的商品化试剂盒，可用于定性测定人血清中抗MUC13的IgG抗体的水平，有助于肝内胆管癌的早期诊断。

技术领域

本发明涉及一种新的、用于早期诊断肝内胆管癌的血清生物标志物，还涉及含有该血清生物标志物的试剂盒。本发明属于医药技术领域。

背景技术

肝内胆管癌(intrahepatic cholangiocarcinoma,iCCA)是起源于肝内胆道上皮的一种高度恶性肿瘤，在肝脏恶性肿瘤中位于第二位。流行病学研究提示近年来其发病率和致死率在世界范围内呈上升趋势。由于起病隐匿、缺乏有效的肿瘤标志物，且具有早期转移的特点，确诊病人大多处于中晚期，失去根治性手术切除或者肝脏移植的机会。同时，肝内胆管癌对传统的放化疗不敏感，缺乏有效的分子靶向药物，使中晚期肝内胆管癌患者处于“无药可用”的窘境。为了降低死亡率，提高肝内胆管癌的治疗效果，关键是肝内胆管癌的早期发现、早期诊断、早期治疗，然而关于肝内胆管癌的诊断方法是及其有限的。从长远角度来看，为了实现对肝内胆管癌的早期高灵敏性，高特异性的诊断，急需在分子水平上寻找到更敏感、更特异的生物标志物。

理想的肝内胆管癌标志物应符合以下5个条件：(1)敏感性高；(2)特异性高；(3)半衰期短，有效治疗后浓度能够很快的下降，能够较快的反应治疗效果；(4)存在于体液，特别是血液中，易于检测。目前还没有符合上述条件的生物标志物开发出来用于诊断肝内胆管癌，为了实现对肝内胆管癌的早期高灵敏性，高特异性的诊断，急需在分子水平上寻找。

MUC13是膜结合型黏蛋白中的一员，基因定位于染色体3q21.2，由α和β两个亚基组成。α亚基位于细胞外部，由串联重复结构域、表皮生长因子样结构域以及海胆子蛋白精氨酸激酶结构域组成。β亚基位于细胞内部，由TM结构域和细胞质尾结构域组成(PMID:21450906)。MUC13在胃肠道上皮、呼吸系统上皮以及生殖道上皮表面呈低水平表达，而在多种胰腺癌、卵巢癌、肾癌组织中表达明显上调(PMID:11278439)。目前，未见有将MUC13蛋白质作为肝内胆管癌生物标志物的报导。

发明内容

针对上述现有技术中存在的问题，本发明提供一种蛋白质MUC13在制备诊断肝内胆管癌的试剂中的应用及诊断试剂盒，来检测人血清中的抗蛋白质MUC13的IgG抗体的水平，作为辅助肝内胆管癌早期诊断的一种手段，以提高肝内胆管癌早期诊断的敏感性和特异性。

为达到上述目的，本发明所采用了以下技术手段：

本发明发明人前期利用人蛋白质组芯片高通量、快速分析的优势，分析了肝内胆管癌相关血清60份(肝内胆管癌病人30份和健康人血清30份)，在较短时间内比较了肝内胆管癌病人和健康人样品中的不同，结果发现MUC13蛋白的表达水平在肝内胆管癌病人中的表达水平明显高于健康人，提示MUC13蛋白可作为肝内胆管癌的候选血清生物标志物，以期早期诊断和有效治疗肝内胆管癌。

在上述研究的基础上，本发明提出了蛋白质MUC13在制备诊断肝内胆管癌的试剂中的应用。

进一步的，本发明还提出了一种用于肝内胆管癌诊断的试剂盒，所述的试剂盒中包括酶标板、人源蛋白质MUC13、包被缓冲液、标准血清、酶标试剂、酶底物溶液、封闭液、样品稀释液、洗涤液和终止液，其中，所述的人源蛋白质MUC13包被于所述酶标板上。

其中，优选的，所述的人源蛋白质MUC13是从酿酒酵母中表达，亲和纯化而得到。