[发明专利]一种无害化布鲁氏菌的检测方法

说明书

本发明涉及一种无害化布鲁氏菌的检测方法，利用杀菌剂对细菌的杀灭作用，取患病动物的生殖器分泌物、眼睛分泌物、粪便或者组织器官，用消毒剂杀死可能的布鲁氏菌，而可能的布鲁氏菌DNA依然存留，经过实验室清洗手段可得到纯化布鲁氏菌DNA，再通过常规PCR、电泳等步骤实现布鲁氏菌的无害化检测。该方法具有无害化的最大优点，在检测准确度高、检测速度快等优点的基础上，让布鲁氏菌的检测变得更加安全、无毒，减少了饲养员、兽医人员、采样人员、实验室人员、防疫人员、屠宰人员以及市民的个人安全风险。

技术领域

本发明涉及一种无害化布鲁氏菌的检测方法，属于生物检测技术领域。

背景技术

布鲁氏菌病(Brucellosis，也称布氏杆菌病，简称布病)是由布鲁氏菌属细菌引起的人兽共患的常见传染病。我国将其列为二类动物疫病。其病原是细胞内寄生的革兰氏阴性菌——布鲁氏菌(Brucella)。它主要引起人的波状热和慢性感染，引起反刍动物睾丸炎和流产等。根据抗原性和主要宿主把布鲁氏菌属的细菌分为6个种，20个生物型。在世界200多个国家和地区中，170多个国家和地区有人、畜布鲁氏菌病存在和流行。约占世界1/5～1/6的人受布鲁氏菌病威胁，全世界现约有500～600万人患布鲁氏菌病，年新发病人约有50万。在中国有25个省(市)、自治区的人、畜有布鲁氏菌病存在和流行，全国受布鲁氏菌病威胁的人口约有3.5亿，1200多个县市为布鲁氏菌病疫区，现有布鲁氏菌病患者30～50万，年新发病人数为5000～6000人，每年实际新病人数为25000～30000人。不同种类的布鲁氏菌大多具有不同宿主间交叉感染的能力，并具有极为明显的宿主危害倾向性。人和羊对羊布鲁氏菌高度易感，引起的危害也最为严重，而牛布鲁氏菌对人的易感性及危害性相对较轻，但对牛则高度易感，危害严重。猪布鲁氏菌对猪和人均表现出高度易感性，危害也较为严重。此病很难产生持久免疫，有布病史的人和动物再次接触病原时，也可能再次感染，因此对人类健康和畜牧业发展构成重大威胁。世界动物卫生组织(OIE)将布鲁氏菌病列为必须报告的动物疫病，我国将该病列为二类动物疫病。任宁宁等报道我国目前牛的流行率达到0-14.7％。陈颖钰等报道，实用虎斑平板凝集实验检测，河北牛的发病率高达35.8％(1227例)。国家卫生计生委联合发布《国家布鲁氏菌病防治计划(2016-2020年)》，实施分区管理，国家对布鲁氏菌病的诊断、防控给予足够的重视。

布鲁氏菌病的诊断主要采用虎斑平板凝集实验(RBPT)，试管凝集试验(SAT)，布病补体结合试验(CFT)，酶联免疫吸附试验(ELISA)，(荧光偏振试验(FPA)等血清学诊断。但血清学诊断存在大量的假阳性，尤其对疫苗注射产生的抗体所产生的假阳性给给防控带来极大困扰。另一方面，检测诊断要采取血液样本，这对采集人员，实验人员带来潜在的感染风险。近十几年来，分子生物学诊断技术发展迅速，用于疾病的诊断，显示出了良好的应用前景。结合分子生物学诊断技术开发一种无害、低风险诊断势在必行。

发明内容

本发明目的是提供一种无害化布鲁氏菌的检测方法。本发明采用无传染性处理(无害化)样本，使用基因诊断，更为高效、精确，是一种行之有效的抗原学诊断方法。无传染性的巨大优势体现于，具有降低接触人员感染的风险，相对于其他方法，这对于布鲁氏菌的采样、检测有不可比拟的作用。

本发明利用消毒剂对细菌的杀灭作用，取患病动物或人的生殖器分泌物、眼睛分泌物、粪便或者组织器官，用消毒剂杀死可能的布鲁氏菌，而可能的布鲁氏菌DNA依然存留，经过实验室清洗手段可得到纯化布鲁氏菌DNA，再通过常规PCR、电泳等步骤实现布鲁氏菌的无传染性检测。

本发明令人惊奇地研究发现，用甲醛或多聚甲醛对待测样本进行处理，既可以彻底杀死待测样本中可能存在的布鲁氏菌，从而能够降低接触人员感染的风险，极大地提高安全性；还可以使得布鲁氏菌DNA依然完整存留，使纯化完整布鲁氏菌DNA成为可能，有利于实现布鲁氏菌的无传染性检测。其他消毒剂(例如84消毒液)造成病菌DNA降解不能进行结果判定，难以进行后续检测，因而甲醛或多聚甲醛具有无可比拟的技术优势。

本发明技术方案如下：