[发明专利]一种无害化布鲁氏菌的检测方法

权利要求书

1.一种对疑似感染布鲁氏菌的样本进行无害化处理的方法，其特征在于，包括用有效量的甲醛或多聚甲醛对待测样本进行处理；

优选地，以处理至彻底杀死待测样本中可能存在的布鲁氏菌且不破坏布鲁氏菌DNA为目标。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述甲醛为甲醛水溶液；所述多聚甲醛为多聚甲醛水溶液；优选地，所述多聚甲醛为4％多聚甲醛溶液。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述待测样本包括动物或人的生殖器分泌物、眼睛分泌物、粪便、组织器官，还包括空气、气溶胶；和/或，

所述动物包括牛、羊、猪、狗、骆驼、鹿、犬、鼠。

4.根据权利要求1-3任一项所述的方法，其特征在于，所述布鲁氏菌包括羊种布鲁氏菌(Brucella melitensis)、牛种布鲁氏菌(Brucella abortus)、猪种布鲁氏菌(Brucellasuis)、绵羊附睾种布鲁氏菌(Brucella ovis)、犬种布鲁氏菌(Brucella canis)、沙林鼠种布鲁氏菌(Brucella neotomae)。

5.一种无害化布鲁氏菌的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)无传染性采样，用甲醛或多聚甲醛杀灭样本中的布鲁氏菌；将无活布鲁氏菌的检测样本进行提取，获得基因组总DNA；

(2)以所获得基因组总DNA为模板，进行PCR；

(3)电泳；

(4)将待测样本DNA电泳条带判断检测结果，与布鲁氏菌DNA电泳条带进行对比，若出现阳性结果，则证明检测样本中含有布鲁氏菌；若出现阴性结果，则证明检测样本中不含布鲁氏菌。

6.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于，所述甲醛为甲醛水溶液；所述多聚甲醛为多聚甲醛水溶液；优选地，所述多聚甲醛为4％多聚甲醛溶液。

7.根据权利要求5或6所述的检测方法，其特征在于，步骤(1)包括：

1)无传染性采取样本1g，滴加10ul的4％多聚甲醛溶液或10ul的10％福尔马林处理后，彻底杀死样本中活的布鲁氏菌；然后加入1×PBS 200ul+90％无水乙醇200ul，作用5min；

2)离心12000rpm，10min，取上清液；

3)DNA纯化，加Sequencing Binding Buffer等量，加到DNA提取试剂盒里，离心12000rpm，30s；

4)加Wash Buffer等量，离心12000r，30s；

5)重复步骤(4)一次；

6)加Elution Buffer等量，换一个新TUBE，离心12000r，30s。

8.根据权利要求5-7任一项所述的检测方法，其特征在于，所述PCR条件：总反应为20ul体系，2×Taq酶10ul，上下游布鲁氏菌OMP引物2ul，DNA 2-8ul；95℃作用5min，进入循环，95℃变性30s，60℃退火30s，72℃延伸1min，共计35个循环，然后72℃延伸7min；和/或，所述电泳条件：1.5％琼脂糖凝胶电泳，电压90V，时间30min，EB染色。

9.根据权利要求5-8任一项所述的检测方法，其特征在于，采样样本包括动物或人的生殖器分泌物、眼睛分泌物、粪便、组织器官，还包括空气、气溶胶；和/或，

所述动物包括牛、羊、猪、狗、骆驼、鹿、犬、鼠。

10.根据权利要求5-9任一项所述的检测方法，其特征在于，所述布鲁氏菌包括羊种布鲁氏菌(Brucella melitensis)、牛种布鲁氏菌(Brucella abortus)、猪种布鲁氏菌(Brucella suis)、绵羊附睾种布鲁氏菌(Brucella ovis)、犬种布鲁氏菌(Brucellacanis)、沙林鼠种布鲁氏菌(Brucella neotomae)。