[发明专利]采用微生物细胞制备糖基化葛根素的方法

说明书

本发明提供采用微生物细胞制备糖基化葛根素的方法，属生物制药技术领域。该方法包括采用海洋微杆菌（Microbacterium thalassium）NJ16在非水相中催化葛根素和糖基供体进行反应，得到糖基化葛根素的步骤；海洋微杆菌（Microbacterium thalassium）NJ16的保藏号为CCTCC NO：M 2013154。本发明采用微生物细胞制备糖基化葛根素的方法，转化率高，由于该方法利用微生物胞内酶进行催化，因此不易失活且可以重复使用，产物易于分离纯化，显著降低成本。

技术领域

本发明属生物制药技术领域，具体涉及采用微生物细胞制备糖基化葛根素的方法。

背景技术

葛根素是从豆科植物野葛等植物中提取的异黄酮葡萄糖碳苷，是中药葛根的主要活性成分之一，具有如降血压、抗肿瘤和抗氧化等多种生物活性，其分子式为C₂₁H₂₀O₉，分子量为416.4。

由于葛根素的水溶性较低(6.24g/L)，通过结构修饰进行糖基化，可提高其溶解度。如：蒋洁蓉等(Jiang JR,Yuan S,Ding JF,et al.Appl Microbiol Biotechnol, 2008,81,647-657.)以氧化微杆菌糖基化葛根素，得到7-O-葡萄糖苷葛根素 (CASRN：1163249-06-6)与7-O-异麦芽糖苷葛根素(CASRN：1163249-07-7)，转化率分别为40％和5％。

通过生物转化对天然产物进行结构修饰，具有转化反应条件温和，转化产物简单易分离等优点，糖基化修饰后，化合物溶解度可显著提高。但是，现有技术中，通过生物转化法制备糖基化葛根素，还存在转化率不高，胞外酶易失活不能重复使用，成本较高等问题。

发明内容

本发明目的是提供采用微生物细胞制备糖基化葛根素的方法，转化率高，由于该方法利用微生物胞内酶进行催化，因此不易失活且可以重复使用，产物易于分离纯化，显著降低成本。

本发明的目的采用如下技术方案实现。

采用微生物细胞制备糖基化葛根素的方法，包括采用海洋微杆菌(Microbacterium thalassium)NJ16在非水相中催化葛根素和糖基供体进行反应，得到糖基化葛根素的步骤；海洋微杆菌(Microbacterium thalassium)NJ16的保藏号为CCTCC NO：M 2013154。

优选的技术方案中，所述糖基供体为蔗糖。

在本发明中反应溶剂是亲水性有机溶剂和pH为4.0～9.0缓冲液的混合物，所述亲水性有机溶剂的体积百分含量为10％～30％，所述亲水性有机溶剂选自二甲基亚砜、二甲基甲酰胺、甲醇、乙醇中的一种或者两种以上的混合物。

优选的技术方案中，海洋微杆菌(Microbacterium thalassium)NJ16固定化后在非水相中催化葛根素和糖基供体进行反应；所述固定化方法如下：将海洋微杆菌(Microbacterium thalassium)NJ16悬浮液与海藻酸钠溶液混合均匀，再滴至CaCl₂溶液中，得到固定化细胞；所述海洋微杆菌(Microbacterium thalassium) NJ16悬浮液的OD₆₈₀为4.0-6.0，CaCl₂溶液的浓度为10-40g/L，海洋微杆菌 (Microbacterium thalassium)NJ16悬浮液与海藻酸钠溶液混合后海藻酸钠的浓度为10-50g/L；固定化细胞包埋量为20～60％。

优选的技术方案中，转化体系中，葛根素的浓度为5～80g/L，蔗糖的浓度为 50～500g/L；固定化细胞与转化体系的体积比为5～50:100，所述转化体系是在反应溶剂中添加葛根素和蔗糖后形成的；反应温度为15～45℃，反应时间为 1～36h。