[发明专利]一种博落回中抗乳腺癌活性成分的制备方法

说明书

本发明公开了一种pH‑区带精制逆流色谱分离博落回中生物碱类化合物的方法，所述分离采用了环境友好型的正己烷/乙酸乙酯/异丙醇/水溶剂体系，所述溶剂体系中各试剂的体积比为1:3:1.5:4.5。本发明方法能够高效的从博落回中分离初纯度达到98％以上的血根碱和白屈菜红碱。并且经抗乳腺癌效果评价试验验证，本发明提取方法得到的血根碱及白屈菜红碱具备抗乳腺癌活性，且具有协同效果，为抗乳腺癌药物的研发提供了新的思路。

技术领域

本发明涉及一种中药有效成分的分离纯化方法，具体涉及一种应用pH区带逆流色谱分离博落回中生物碱类化合物(血根碱、白屈菜红碱)的方法。

背景技术

博落回为罂粟科博落回属植物博落回Macleayacordata(Willd.)R.Br.的地上部分，主要分布在中国以及东南亚，在我国主要分布在湖南、安徽、江苏、浙江等省。博落回富含生物碱，现代药理学表明，博落回中具有促进动物生长、抗菌、抗炎、抗肿瘤等作用。基于博落回开发的产品主要有美佑壮、博落回注射液、博落回肿痒酊等。传统的生物碱单体成分的分离方法包括硅胶柱色谱、制备液相色谱、大孔树脂等，其局限性是费时费力、污染环境、样品纯度低，而且反复柱层析对样品有不可逆性吸附作用，分离得到生物碱单体制备效率低、成本较高。

高速逆流色谱(High-speed Counter-current Chromatography，HSCCC)是近30年发展起来的一种连续的无需任何固体支持物的高效、快速的液-液分配色谱分离技术，它避免了固态支持体或载体带来的样品易被死吸附、损耗和变性等各种问题，使用其它液相色谱法进行制备型分离时，其分配效率会显著降低，溶剂消耗量大，HSCCC保证较高峰型分辨度，分离量大、样品无损失、回收率高、分离环境缓和，节约溶剂。高速逆流色谱能直接进大量粗提样品或合成混合物，分离结果能达到相当高的纯度，已广泛应用于生物、医药、环保等领域化学物质的制备分离和纯化。pH区带逆流色谱(pH-Zone-Refining Counter-current Chromatography，PZRCCC)是在逆流色谱基础上发展起来的一种新型制备型分离技术，利用物质解离常数和疏水性的不同进行分离，具有分离量大、分离效果好等优点，广泛的应用于生物碱和有机酸类成分的分离。Liu等(Liu Q,Sun C,Meng F,etal.Preparative Separation of Chelerythrine and Sanguinarine fromMacleayacordata by pH-Zone-Refining Counter-current Chromatography.Journal ofLiquid ChromatographyRelated Technologies,2015,38(20):1789-1793.)采用PZRCCC技术对博落回中生物碱进行了分离，溶剂体系为氯仿/乙酸乙酯/甲醇/水，该文章的局限性在于氯仿为环境不友好型有机溶剂，对光敏感，遇光照会与空气中的氧作用，逐渐分解而生成剧毒的光气(碳酰氯)和氯化氢。主要作用于中枢神经系统，具有麻醉作用，对心、肝、肾有损害。

虽然现有技术中有利用pH-区带精制逆流色谱分离中药中生物碱的报道，本领域公知，pH-区带精制逆流色谱分离中所用到的溶剂系统是影响分离结果的关键因素之一。不同中药提取物包含的成分，以及生物碱的种类和数量不一样，所以，面对不同的中药，不同的提取物，其溶剂系统的溶剂种类、及溶剂之间的用量比例，是不具备参考价值的。

开发从博落回中高效提取高纯度的血根碱和白屈菜红碱的提取分离方法对于抗肿瘤药物的开发也具有重要意义。

发明内容

本发明目的在于提供一种成本经济，操作简便，效率高，可以较大批量从博落回中分离制备出纯度大于98％的生物碱单体化合物的方法。

为了实现上述目的，本发明提供以下技术方案：

本发明目的之一在于提供一种分离博落回中血根碱和白屈菜红碱的方法，该方法包括以下步骤：