[发明专利]一种具有抗菌活性澳洲坚果多肽的制备方法

说明书

本发明提供了一种制备具有抗菌活性澳洲坚果多肽的方法，属于植物多肽制备领域。本发明提供的方法，是以澳洲坚果粕为原料，通过加入特定的复合酶进行酶解，从而实现水解蛋白获得具有特定结构的多肽，再通过对多肽进行分子量截留而获得。采用本发明方法获得的澳洲坚果多肽表现出对多种菌种均具有较强的抑菌活性。

技术领域

本发明属于植物多肽制备技术领域，具体涉及一种具有抗菌活性澳洲坚果多肽的制备方法。

背景技术

澳洲坚果(Macadamia spp.)，又名昆士兰栗、夏威夷果、巴布果、澳洲胡桃等，是山龙眼科(Proteaceae)澳洲坚果属(Macadamia F.Muell)多年生常绿果树，原产于澳大利亚昆士兰东南部和新西兰威尔士东北部(南纬25～29°)的亚热带森林，是世界著名的坚果。澳洲坚果从20世纪70年代开始引入中国，云南自1981年开始引种，1996年开始生产性规模种植，至2017年底全省种植面积已达260多万亩。澳洲坚果可食部分为果仁，含油量高、营养丰富、可生吃，烤制后酥脆可口，质地细腻，带有奶油清香，风味极佳，经济价值高，在国际市场上深受青睐，被誉为“坚果之王”。随着《云南省澳洲坚果产业规划(2013—2020)》的实施，我国澳洲坚果壳果产量有望达到100万t/年，澳洲坚果油将成为重要的产品形式。澳洲坚果油为单一不饱和脂肪酸，其中油酸和棕榈油酸占81.8％，油质清亮透明，是高级的天然色拉油。经榨油后的副产物澳洲坚果粕中含有较高含量的蛋白质、谷氨酸、精氨酸、天冬氨酸、亮氨酸与赖氨酸，通过酶法制备多肽是提高澳洲坚果粕蛋白利用率的有效途径之一。

多肽是指分子结构介于氨基酸和蛋白质之间的一类化合物，由多种氨基酸按照一定的排列顺序通过肽键结合而成，它是由多个分子α-氨基酸的—NH₂与—COOH互相缩合失水后形成10～50个肽键(—CONH—)的长链化合物。多肽除了具有易被人体消化吸收的特性外，还有多种对人体有益的生理功能，如抗氧化性、降血压、降低胆固醇含量、促进钙吸收等。多肽的制备可由酶解法水解蛋白质获得，相对于化学法，酶解法水解蛋白质具有反应条件温和、反应时间短、产品营养价值高等优点。多肽性能的决定因素是由构成多肽的氨基酸来决定的，具体而言是由氨基酸的种类、氨基酸的数量以及氨基酸的排列顺序来决定的。在多肽制备时，酶的种类决定着氨基酸的种类，酶的用量和酶的组分比例决定着多肽中各种氨基酸数目的比例和多肽的氨基酸排列顺序，从而决定着多肽的不同性能。目前，利用蛋白酶水解法提取澳洲坚果蛋白制备多肽已有文献报道。

但是，尚未发现有制备澳洲坚果抗菌肽的相关报道，研究澳洲坚果抗菌肽对不同菌种的抗菌活性有着重要意义。

发明内容

本发明的目的就是为了解决上述技术问题，从而提供一种具有抗菌活性澳洲坚果多肽的制备方法，以期解决在澳洲坚果抗菌肽的制备上尚处于空白的报道。

为了实现上述目的，本发明采用的技术方案为：一种具有抗菌活性澳洲坚果多肽的制备方法，包括如下步骤：

(1)取澳洲坚果果仁，经烘干后进行冷榨脱脂，得到澳洲坚果粕，经乙醇充分浸提后，向浸提液中加入复合酶进行酶解，调节酶解的pH值为7.5～8.0，酶解温度为45～50℃，酶解反应的时间为1.5～2.0h；所述复合酶的组成按质量比计为：中性蛋白酶：碱性蛋白酶：木瓜蛋白酶＝2:1:1，复合酶用量为澳洲坚果粕质量的1～1.5％；酶解完毕后进行灭酶处理，得到澳洲坚果酶解多肽液；

(2)将步骤(1)所得酶解多肽液冷却至室温，离心后取上清液，调pH值至4.6，静置30min后再次离心，收集上清液；

(3)将步骤(2)收集的上清液装入透析袋中进行透析，透析两次后截留分子量为2000～3500Da的透析液，即得澳洲坚果抗菌活性多肽。